2020-01-14
96
Микробное число воды - количество микробов в 1 мл используемой воды - определяют путем высева воды на мясопептонный агар.
Исследуемую воду разводят в 10, 100 и 1000 раз. В пробирку с 9 мл стерильной воды вносят 1 мл исследуемой воды (разведение 1:10), затем после перемешивания другой пипеткой переносят в аналогичную пробирку 1 мл разведенной воды (разведение 1: 100) и т. д. По 1 мл полученных разведении воды, начиная с большего, переносят в маркированные стерильные чашки Петри и заливают 10 мл расплавленного и охлажденного до 45°С мясопептонного агара. Осторожно кругообразными движениями перемещают по поверхности стола чашку Петри, перемешивая содержимое. Затем чашки Петри с застывшим загаром переворачивают вверх дном и помещают на сутки в термостат. При исследовании водопроводной воды в каждую из двух чашек засевают 1 мл неразведенной воды.
Таблица 17
Определение микробного числа воды
| Ингредиенты | Разведения исследуемой воды | ||||
| 1:10 | 1:100 | 1:1000 | |||
| Исследуемая вода, мл Мясопептонный агар, мл Количество выросших колоний | 1,0 10,0 | 1,0 10,0 | 1,0 10,0 | ||
| Результат |
| ||||
Задание 2. Определить коли-титр воды бродильным методом: сделать посевы исследуемой воды на глюкозопептонную среду (табл. 18).
Материалы и оборудование. Колба с исследуемой водой - 50 мл; пробирки с разведенной водой в 10, 100 раз (приготовленные при определении микробного числа воды); пробирки с концентрированной глюкозопептонной средой - одна с 10 мл и одна с 1 мл среды; 3 пробирки, содержащие по 10 мл среды нормальной концентрации; гашетки на 10 мл и на 1-2 мл.
Методические указания к выполнению работы.
Коли-титр - наименьшее количество воды (мл), в котором обнаруживается хотя бы одна кишечная палочка. Наличие кишечной палочки в воде указывает на загрязнение ее содержимым желудочно-кишечного тракта. В отличие от других микроорганизмов воды, кишечная палочка может развиваться при температуре 43-460С, легко сбраживает углеводы с образованием кислоты и газа. Это свойство микроба положено в основу определения коли-титра. Существует несколько методов определения коли-титра.
Сущность метода заключается в посеве определенных объемов исследуемой воды в среде накопления (глюкозо-пептонная или лактозопептонная среда с индикатором и поплавком), последующем культивировании посевов и высеве из забродивших пробирок на среду Эндо. Выросшие на среде Эндо колонии изучают с целью определения БКГП. Затем определяют по расчетным таблицам коли-титр и коли-индекс.
Для анализа отбирают различные объемы воды, регламентированные ГОСТом 18963-73.
Первый этап. В случае исследования воды на этапах очистки и обеззараживания производят посев 100; 10; 1; 0,1; 0,01 мл воды соответственно во флаконы с 10 и 1 мл концентрированной среды накопления и 10, 10 и 10 мл среды накопления нормальной концентрации. При исследовании питьевой водопроводной воды производят посев 100, 100, 100 и 10, 10, 10 мл воды соответственно во флаконы с 10 и 1 мл концентрированной среды накопления и по 1, 1, 1 мл в 10 мл среды накопления нормальной концентрации. Культивирование посевов производят при температуре 37° в течение 24 ч.
|
|
|
Таблица 18
Определение коли-титра воды
| Этапы исследования | Объем засеваемой воды, мл | ||||
| 100 | 10 | 1 | 0,1 или 1(1:10) | 0,01 или 1(1:100) | |
| I этап. Посев в пробирки с глюкозопептонной средой, мл | 10 (конц.) | 1 (конц.) | 10 (норм, конц.) | 10 (норм, конц.) | 10 (норм, конц.) |
| Культивирование посевов производят при температуре 37° в течение 24 ч.
| |||||
| Результат (+ или -) | |||||
| 2 этап. Произвести высев из глюкозопептонной среды на среду Эндо из положительных проб секторами | |||||
| Культивирование посевов производят при температуре 37° в течение 16-18 ч.
| |||||
| Результат: цвет колоний микроскопия проба на оксидазу | |||||
| 3 этап. Высев со среды Эндо в глюкозопептонную среду | |||||
| Культивирование посевов производят при температуре 37° в течение 16-18 ч.
| |||||
| Результат (+или -) | |||||
| Заключение: |
| ||||
Второй этап. Продолжить определение коли-титра воды бродильным методом: учесть результаты брожения в глюкозопептонной среде и записать в табл. 18; из положительных проб произвести высев на сектора среды Эндо.
В среде накопления - глюкозопептонной среде - учитывают положительные пробы (по помутнению, кислото- и газообразованию или по помутнению и кислотообразованию) и отмечают результаты в табл.. Из положительных проб производят высевы в чашки Петри на среду Эндо, разделенную на 3-4 сектора в зависимости от количества положительных проб. Посевы необходимо производить штрихами, чтобы получить рост изолированных колоний. Культивируют посевы при температуре 37°С в течение 16-18 ч.
Третий этап. Закончить определение коли-титра воды бродильным методом: учесть характер роста на среде Эндо. Записать результаты и заключение в табл.
При учете результатов на среде Эндо изучают цвет выросших колоний. Если на секторах среды выросли темно-красные колонии, характерные для БГКП, то проводят подтверждающие исследования путем микроскопии окрашенных по Граму мазков и постановки оксидазного теста. Для этого по 2-3 характерные колонии снимают петлей и наносят на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом. При отсутствии изменения цвета бумаги пробу на оксидазу считают отрицательной и, наоборот, посинение бумаги в течение 1 мин свидетельствует о наличии активной оксидазы у бактерий. Обнаружение в мазках грамотрицательных палочек с отрицательным оксидазным тестом позволяет дать положительный ответ о наличии БГКП в исследуемой пробе воды.
Таблица 19
Расчет числа БГКТТ в 1 л при исследовании 300 мл питьевой воды централизованного водоснабжения
| Число положитель- | |||||||||
| ных результатов из | Число положитель- | ||||||||
| 3-х объемов | Коли- | Коли- | ных результатов из | Коли- | Коли- | ||||
| индекс | титр | 3-х объемов | индекс | Титр | |||||
| по | по | по | по | по | по | ||||
| 100 | 10мл | 1 мл | 100 мл | 10мл | 1 мл | ||||
| мл | |||||||||
| 0 | 0 | 0 | <3 | >333 | 3 | 0 | 0 | 23 | 43 |
| 0 | 0 | 1 | 3 | 333 | 3 | 0 | 1 | 39 | 26 |
| 0 | 1 | 0 | 3 | 333 | 3 | 0 | 2 | 64 | 16 |
| 1 | 0 | 0 | 4 | 250 | 3 | 1 | 0 | 43 | 23 |
| 1 | 0 | 1 | 7 | 143 | 3 | 1 | 1 | 75 | 13 |
| 1 | 1 | 0 | 7 | 143 | 3 | 1 | 2 | 120 | 8 |
| 1 | 1 | 1 | 11 | 91 | 3 | 2 | 0 | 93 | 11 |
| 1 | 2 | 0 | 11 | 91 | 3 | 2 | 1 | 150 | 7 |
| 2 | 0 | 0 | 9 | 111 | 3 | 2 | 2 | 210 | 5 |
| 2 | 0 | 1 | 14 | 72 | 3 | 3 | 0 | 240 | 4 |
| 2 | 1 | 0 | 15 | 67 | 3 | 3 | 1 | 460 | 2 |
| 2 | 1 | 1 | 20 | 50 | 3 | з | 2 | 1100 | 0.9 |
| 2 | 2 | 0 | 21 | 48 | 3 | 3 | 3 | >1100 | <0,9 |
| 2 | 2 | 1 | 28 | 86 | |||||
|
|
|
Таблица20
Определение БГКП в 1 мл при исследовании 500 мл питьевой воды централизованного водоснабжения
| Число положительных результатов из5 объемов по 100 мл | Коли-титр | Коли-индекс | Число положительных результатов из5 объемов по 100 мл | Коли-титр | Коли-индекс |
| 0 | >455 | <2 | 3 | 109 | 9 |
| 1 | 455 | 2 | 4 | 62 | 16 |
| 2 | 196 | 5 | 5 | <62 | >1б |
Задание 4. Определить коли-индекс воды методом мембранных фильтров, используя демонстрацию.
Материалы и оборудование. Чашки Петри со средой Эндо с выросшими на фильтре колониями бактерий группы кишечной палочки.
