Методические указания к выполнению работы

1 этап. При исследовании воды на сальмонеллы питьевую воду и воду открытых водоемов засевают по 200 мл в среды обогащения - селенитовую среду (или магниевую среду) двойной концентрации. Посевы культивируют при температуре 37°С в течение 18-20 ч.

2 этап. Продолжить исследование воды на наличие сальмонелл: отметить в протоколах исследования характер роста на пептонной во­де и селенитовой среде, пересеять из селенитовой среды на среду Эндо и висмут-сульфитный агар.

При наличии диффузного роста в колбах с селенитовой средой делают высев на чашки Петри со средой Эндо и на 2-3 чашки с висмут-сульфитным агаром. Посевы помещают в термостат на 18-20 ч при темпе­ратуре 37°С

Заполнить табл.2, 4, 5, 8.

Санитарная оценка воды. Согласно ГОСТ 2874-73 на питье­вую воду, общее количество микробов (микробное число) в 1 мл при посеве не разведенной воды и выдерживании ее в течение 24 ч при 37 °С должно быть не более 100. В 1 л воды при определении методом мембранных фильтров кишечных палочек должно быть не более трех. При использовании бродильных проб титр кишеч­ной палочки должен быть не менее 300. К водопроводной воде в городах с населением свыше 1 млн. человек должны предъявляться более высокие требования.

Вода открытых водоемов считается хорошей при коли-титре 100, коли-индексе 10. При коли-титре ниже 1 вода непригодна к употреблению. Следовательно, чем выше коли-титр, тем вода чище, лучше, и наоборот, чем ниже, тем качество ее хуже.

Для демонстрации плохой и хорошей воды открытых водоемов ее высевают на среду Булижа: в первый ряд - с коли-титром 100 и выше (вода хорошая); во второй - с коли-титром 0,1 и ниже (вода плохая). По изменению окрашивания среды (от мали­ново-красной до желтой) можно установить наличие кишечной палочки в определенном объеме исследуемой воды и ее качество.

Подсчет колоний в чашках Петри. На мясопептонном агаре в чашках Петри подсчитывают выросшие колонии из разведении 10 ^-2, 10 ^-1 и не разведенной воды. После подсчета ко­лоний получаемый результат умножают на разведение и определяют среднее число.

Качество воды оценивают по содержанию микро­бов в 1 мл:

Хорошая вода до 100,

Сомнительная вода от 100 до 500,

Плохая вода от 500 и более,

 

Контрольные вопросы:

1. Правила отбора проб для бактериологического исследования водопроводной воды и открытых водоемов.

2. Расскажите о бактериологическом исследовании воды.

1. Прямой метод обнаружения патогенных микроорганизмов в воде.
2. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха.

Занятие 7

Тема: Санитарно-микробиологическое исследование почвы.

4 часа

Цель занятия. Овладеть методами санитарно-бактериологического ис­следования воздуха, воды.

Содержание занятия:

1) определение микробного числа почвы;

2) определение коли-титра почвы;

3) определение перфрингенс-титра почвы.

Методические указания к выполнению работы

Оценка фекального загрязнения почвы и его давности производятся по коли-титру, перфрингенс-титру, иногда по титру энтерококков. Параллельно с этими показателями определяется микробное число почвы. Предварительно производят отбор проб почвы. На обследуемой территории площадью до 1000 м²выбирают два участка по 25 м² (один - вблизи источника загрязне­ния, другой - в отдалении от него. На каждом из участков (с соблюдением стерильности) берут из 5 точек (4 - по углам участка, одна - в центре) на глубине 10-20 см стерильным совком (из более глубоких с помощью специального бура.

Помещают по 200-300 г почвы в широкогорлые колбы с ватными пробками (можно все взятые пробы одного участка перемешать и направить на исследование. На банки наклеивают этикетки, пишут сопроводительное письмо и отправляют с нарочный. Пробы почвы полагается исследовать сра­зу же или в течение 6-18 ч, сохраняя их при температуре не выше 1-5 °С.

В лаборатории пробу почвы измельчают, освобождают от камней, оскол­ков стекол, корней растений, просеивают через сито, тщательно перемеши­вают и отвешивают 30 г. в колбу объемом 500 мл, наливают 270 мл стериль­ной водопроводной воды и вносят в нее отвешенную пробу почвы, все ин­тенсивно встряхивают 10 минут и, не давая отстояться частицам суспензии, готовят серию десятикратных последовательных разведений.

 

Задание 1. Определить микробное число почвы; посеять почвенную болтушку в чашки с мясопептонным агаром (табл.22).

 

Материалы и оборудование. Пробирка с 10% суспензией почвы (почвен­ная болтушка), пробирки со стерильной водой по 9 мл, пипетки на 1-2 мл, пробирки с мясопептонным агаром по 15 мл, стерильные чашки Петри, лупа (X 5) или счетная камера.

Методические указание к выполнению работы.

При определении микробного числа почвы по 1 мл приготовленных разве­дении почвенной суспензии вносят в чашки Петри, заливают расплавленным и охлажденным мясопептонным агаром; культивируют 48 ч при 28-30°С.

Таблица 22

Определение микробного числа почвы

Ингредиенты	Номера пробирок
	1	2	3
Засеваемые объемы, мл	1	1(1:100)	1(1:100)
Мясопептонный агар, мл	15	15	15
Результат
Заключение

Подсчитать выросшие в толще агара и на поверхности колонии, пользуясь лупой (X 5) или счетной камерой. Высчитать среднее арифметическое. Записать в табл. 9 результат и заключение.

 

Задание 2. Определить коли-титр почвы (I этап): посеять почвенную болтушку в среду Кесслера (табл. 23).

 

Материалы и оборудование: Пробирка с 10% суспензией почвы, пробир­ки с разведениями (1:10, 1:100) почвенной болтушки, пробирки со средой Кесслера по 9 мл, пипетки на 1-2 мл.

 

Методические указания к выполнению работы.

Готовят 10% почвенную суспензию, из нее делают разведения. Из суспен­зии и разведении 1:10,1:100 засевают по 1 мл в пробирки со средой Кессле­ра. Таким образом, в среду вносятся 0,1 г, 0,01 и 0,001 г исследуемой почвы.

Таблица 23

Определение коли-титра почвы

 

Этапы исследования	Номера пробирок
	1	2	3
Засеваемые объемы, мл	1 (0.1 г)	1 (1: 10) (0,01 г)	1(1: 100) (0,001 г)
Среда Кесслера, мл	9	9	9
Высев на среду Эндо (секторами)
Результат
Заключение

 

Задание 3. Определить перфрингенс-титр почвы: посеять почвенную болтушку в среду Вильсона - Блера (табл.11).

Материалы и оборудование: Пробирка с 10% суспензией почвы, пробир­ки с разведениями суспензии (1:10,1:100), стерильные пробирки, гашетки на 1-2 мл, стерильные чашки Петри, пробирки со средой Вильсона-Блера по 15 мл, водяная баня, термометр.