Санитарно-микробиологическое исследование предметов обихода и рук персонала

 

Цель занятия:

1. Овладеть методами отбора проб и санитарно-бактериологического ис­следования предметов обихода и рук персонала.

2. Определить степень микробной загрязненности кожи рук и предметов обихода.

Содержание занятия:

1. Провести отбор проб (смывов) и бактериологическое исследование предметов обихода и рук персонала.

2. Провести учет санитарно-микробиологических исследований предметов обихода и рук персонала. Результаты записать в тетрадь.

 

Методические указания. Изучение бактериальной загрязненности рук и различных предметов оби­хода производится в целях оценки санитарно-гигиенического состояния ис­следуемого объекта, установления путей распространения инфекции при эпи­демиологических заболеваниях, лабораторного контроля эффективности об­работки кожи рук.

В зависимости от цели проводимого исследования и характера контролиру­емых объектов в полученных смывах определяют:

• общую микробную обсемененность (обычно с пересчетом на 1 см² иссле­дуемой поверхности);

• наличие бактерий группы кишечной палочки, как показателей фекально­го загрязнения;

• наличие патогенных бактерий кишечной группы, обнаружение которых является безусловным показателем эпидемического неблагополучия;

• наличие стафилококков и других микроорганизмов.

 

Приготовление смывов. Для получения смывов пользуются стерильными ват­ными тампонами или марлевыми салфетками. В день взятия смыва в каждую пробирку с тампоном наливают 2 мл стерильной водопроводной воды или изотонического раствора хлорида натрия так, чтобы ватный тампон находился над уровнем жидкости. Марлевые салфетки 5 х 5 см заворачивают по одной в бумагу. К каждой салфетке готовят заранее пробирку с 2 мл стерильной воды для смачивания. Непосредственно перед взятием смыва пробирку наклоняют, увлажняя находящийся в ней тампон. В случае применения салфеток их захва­тывают кончиком стерильного пинцета, прокаленного над пламенем горелки, и увлажняют стерильной водой из пробирки.

Увлажненный тампон или салфетку дают в руки обследуемому, предлагая протереть им сначала кожу левой, а затем правой руки (от участков с меньшей к участкам с большей загрязненностью): тыл кисти, поверхность ладони, меж­пальцевые пространства, ногтевые ложа. По окончании процедуры салфетки или тампоны помещают в пробирку, в которой они находились.

При взятии смывов с предметов, имеющих большую поверхность, исследу­емый участок ограничивают рамкой-трафаретом площадью 25, 50 или 100 см². Трафарет, изготовленный из проволоки, после каждого смыва и перед упо­треблением прожигают над пламенем горелки. При исследовании мелких пред­метов смыв делают со всей поверхности.

Задание 1. Приготовить смывы с поверхности столов учебной аудитории и провести их бактериологическое исследование по определению общего микробного числа

 

Материалы и оборудование. Стерильные тампоны, стерильные чашки Петри, пробирки со стерильным мясопептонным агаром по 15мл, пробирки с 2 и 5 мл стерильной воды, резиновые груши и пипетки градуированные на 1 и 2 мл, спиртовка.

 

 Для определения общего числа микроорганизмов в исследуемом смыве к 2 мл воды, которая была использована для увлажнения тампона, прибавляют еще 8 мл стерильной воды. Тампон тщательно в течение 2-3 мин отмывают, получая исходное разведение. Из него готовят ряд после­довательных десятикратных разведений. Затем из различных разведений смыва берут по 1 мл, вносят в стерильные чашки Петри, заливают расплавленным и остуженным МПА. Посевы выдерживают 24 ч при 37 °С и 24 ч при комнатной температуре, после чего производят подсчет выросших колоний.

Устанавливают количество микроорганизмов в 1 мл исходного разведения смыва (для этого подсчитывают число колоний в чашке и полученную величи­ну умножают на степень разведения смыва).

Определяют количество микроорганизмов в 10 мл смыва, соответствующее общему числу микроорганизмов, находящихся на той площади, с которой произведен смыв (для этого величину, соответствующую количеству микроор­ганизмов в 1 мл смыва, умножают на 10).

Определяют количество микроорганизмов на 1 см² исследуемой поверхно­сти (для этого величину, характеризующую количество микроорганизмов в 1 мл смыва, делят на число квадратных сантиметров, с которых сделан смыв).

 

Задание 2. Приготовить смывы с поверхности рук и провести их бактериологическое исследование по определению общего микробного числа, бактерий группы кишечной палочки и стафилококков

 

Материалы и оборудование. Стерильные тампоны, стерильные чашки Петри, пробирки со стерильным мясопептонным агаром по 15мл, пробирки с 2 и 5 мл стерильной воды, резиновые груши и пипетки градуированные на 1 и 2 мл, спиртовка, питательные среды: Кесслера, КОДА, Эндо, вис­мут-сульфит агар, Плоскирева, молочно-солевой или желточно-солевой агар, селенитовый и солевой бульон - МПБ, содержащий 6,5 % NaCl бульоны.

1. Для выявления бактерий группы кишечной палочки можно пользоваться пря­мым посевом исследуемого материала на чашки со средой Эндо. Материал, находящийся на тампоне, втирают в поверхность питательной среды Эндо. Кроме того, используют среды обогащения (среда Кесслера, КОДА и др.) - в этом случае тампон, снятый с палочки, помещают в соответствующую жидкую сре­ду. Посевы на плотных средах инкубируют при 37 °С, на жидких средах - при 43 °С в течение 18 - 24 ч. На второй день из флаконов с признаками роста производят высев на чашки со средой Эндо. Дальнейший ход исследования полностью соответствует стандартной схеме выявления бактерий группы ки­шечной палочки.

Для выявления патогенных бактерий кишечной группы содержащийся на там­поне материал тщательно втирают в поверхность плотных питательных сред (вис­мут-сульфит агар и др.). После произведенного посева тампон и оставшуюся в пробирке жидкость-смыв помещают в среду обогащения (селенитовый бульон). Через 24-48 ч инкубации при 37 °С просматривают посевы, сделанные на плот­ные среды, выявляя колонии, характерные для патогенных бактерий кишечной группы. Идентификация выделенных микроорганизмов с бактериями группы сальмонелл производится по методам, изложенным выше.

2. Для выявления стафилококка производят посев 0,5-1 мл смыва на молочно-солевой или желточно-солевой агар и в среду накопления (солевой бульон - МПБ, содержащий 6,5 % NaCl). Колонии с признаками, характерными для сатфилококков, изучают, согласно МУ

Просматривают посевы на плотных средах. Из подозрительных колоний де­лают препараты, окрашивают по Граму. Проверяют наличие каталазы. Staphylococcus aureus - неподвижные кокки, расположенные одиночно, пара­ми или гроздьями. Грамположительны, каталазоположительны, обычно оксидазоотрицательны. Из пробирок с солевым бульоном делают высев на желточно-солевой (колонии имеют форму плоских дисков (диаметр 2 - 4 мм) белого, желтого, кремового, лимонного, золотистого цвета с ровными краями; вокруг колоний образуются радужное кольцо и зона помутнения среды) или молочно-солевой агар (мутные, круглые, ровные, выпуклые колонии белого, кремо­вого, желтого или оранжевого цвета 2 - 4 мм в диаметре), проводят предвари­тельную идентификацию, как описано выше. Делают вывод о возможном на­личии Staphylococcus aureus в исследуемом образце. Полную схему идентифика­ции золотистого стафилококка можно найти в специальных руководствах.

.

3. Для определения общего числа микроорганизмов в исследуемом смыве к 2 мл воды, которая была использована для увлажнения тампона, прибавляют еще 8 мл стерильной воды. Тампон тщательно в течение 2-3 мин отмывают, получая исходное разведение. Из него готовят ряд после­довательных десятикратных разведений. Затем из различных разведений смыва берут по 1 мл, вносят в стерильные чашки Петри, заливают расплавленным и остуженным МПА. Посевы выдерживают 24 ч при 37 °С и 24 ч при комнатной температуре, после чего производят подсчет выросших колоний.

Устанавливают количество микроорганизмов в 1 мл исходного разведения смыва (для этого подсчитывают число колоний в чашке и полученную величи­ну умножают на степень разведения смыва).

Определяют количество микроорганизмов в 10 мл смыва, соответствующее общему числу микроорганизмов, находящихся на той площади, с которой произведен смыв (для этого величину, соответствующую количеству микроор­ганизмов в 1 мл смыва, умножают на 10).

 

Контрольные вопросы:

1. Расскажите о бактериологическом исследовании смывов с поверхности предметов обихода.

2. Расскажите об исследовании микрофлоры поверхности рук.

 

 

Занятие 12