Цитогенетический метод

Основан на изучении строения и функций хромосом. Суть метода заключается в микроскопическом анализе хромосом, позволяющим выявить числовые и структурные изменения хромосом.

Применяется как диагностический тест при выраженных хромосомных синдромах (группа признаков, объединенных общим патологическим состоянием), трисомиях (2n+1), полисомиях, моносомиях (2n-1), при тяжелых психологических расстройствах, спонтанных абортах, когда клинически заболевание трудно определить.

Кариотипирование

Кариотипы рассматриваются в стадию метафазы, когда хромосомы располагаются в одной плоскости (метафазная пластинка).

Синдром Дауна 47хх(ху) + 21. Хромосомы окрашивают плотным или равномерным окрашиванием – рутинная окраска (азур – эозин, краситель Гимза). 

Этот метод позволяет: подсчитать хромосомы, определить групповую принадлежность, но индивидуально идентифицировать невозможно.

Поэтому применяются методы дифференциального окрашивания и благодаря специфическому линейному рисунку можно дифференцировать хромосомы.

(GТG) – G метод с применением трипсина

(QFQ) – Q метод с применением акрихина. 

Для описания кариотипа человек и его изменений применяется специфические символы и универсальная схема:

1) Описание кариотипа. Общее число хромосом в клетке, затем ставиться запятая и обозначается набор половых хромосом, в случае патологии ставиться запятая и обозначается хромосомная аномалия. 46,хх – нормальный кариотип; 46,хх,+21 – индивидуальный полиморфизм (индивидуальные особенности строения хромосом). 46,хх9gh+ - увеличение гетерохроматинового участка в длинном плече хромосомы 9 женщины; 46ху15ps+pat – мужчиной унаследовано от отца, увеличены спутники на хромосомы 15.

2) Определение хроматина. Наряду с изучением митотических хромосом, полученную информацию получают при наблюдении интерфазных клеток. Мужчин и женщин различают по наличию в интерфазном ядре так называемого тельца Бара или полового хроматина. Он есть только у женщин. Идентификация полового хроматина в клетках соскоба слизистой оболочки рта широко применяется для определения генетического пола (спортивная медицина).

Метод дерматоглифики

Дерматоглифика – наука, которая занимается изучением признаков здоровья на коже ладонной стороны кистей и стоп человека.

Установленная наследственная обусловленность узоров. На характер пальцевого и ладонного узоров большое внимание оказывает мать через механизм цитоплазматической наследственности.

Дерматоглифические исследования важны:

1) при идентификации зиготности близнецов (из 10 пар пальцев не больше 7 имеют сходные узоры – однояйцевость, если 4-5 – в пользу разнояйцевости близнецов)

2) изучение людей с хромосомными болезнями выявило изменение не только рисунков пальцев, но и характера основных борозд на кожи ладоней (синдром Дауна, синдром Клайнфельтера, синдром Шершерского – Тернера). Метод дерматоглифики используется в диагностике этих заболеваний.

Менее изучены дерматоглифические изменения при генных болезнях. Однако описаны специфические отклонения этих показателей при шизофрении, миастении, лимфоидной лейкемии.

Этот метод применяется с целью установления отцовства.

 

Иммуногенетический метод

Он основывается на анализе групп крови, белков сыворотки крови, лейкоцитарных антигенов и так далее.

Если у обоих близнецов по этим признакам различий нет, их считают монозиготными.

 

Популяционно-статистический метод

При помощи приемов биометрии (вариационной статистики) констатируется частота распространения отдельных генов (аллелей) в человеческих популяциях.

Закон Харди – Вайнберга

  При наличии альтернативных форм (аллелей) в популяции при условии свободного скрещивания, при равной вероятности встречи _____________, при одинаковой жизнеспособности генотипов, первоначальное отношение аллелей, независимо от абсолютной исходной частоты сохраняется во всех последующих поколениях (частота генов не меняется).

Фонд гамет отцов: p (спер.) + q (спер.)

Фонд гамет матерей: p (яйц.) + q (яйц.)

Частота зигот: (p (спер.) + q (спер.)) х (p (яйц.) + q (яйц.))

              р ² + 2рq+q² =1

                    (АА) р ² + (Аа) 2рq+(аа) q² =1

 

Пример: Нужно определить количество гетерозиготных носителей в населении. В случае аутосомно – рецессивной патологии, при которой выявление гетерозиготных носителей представляет сложную диагностическую процедуру. На основании законов Менделя выпишем генотипы:

АА – здоровые гомозиготные по нормальному доминантному аллелю

Аа – здоровые гетерозиготные носители

аа – больные аутосомно – рецессивным заболеванием

Заболевание встречается 1:10000 - q²

Частота заболеваний q = q² = 1/10.000 = 0,01

                                  p = 1-q = 0,99

Число гетерозигот (АА) в популяции, рассчитываем частоту генотипа АА (2pq)

2pq = 2x0,99x0,01 = 0,0198

Потомство обследованных индивидов в выборке (25.000 чел.)

25.000х0,0198 = 495 чел.

 

Метод пренатальной диагностики

Пренатальная диагностика – дородовое определение врожденной или наследственной патологии у плода.

Показания к пренатальной диагностики:

1. наличие в семье наследственного заболевания

2. возраст матери >35 лет, отца > 45 лет.

3. наличие у матери х – сцепленного рецессивного гена

4. беременности, имеющие в анамнезе выкидыши, спонтанные роды, детей с патологиями

5. гетерозиготность обоих родителей при аутосомно – рецессивном заболевании

 

Методы пренатальной диагностики: инвазивные и неинвазивные

Инвазивные: амниоцентез, биопсия хориона (7-16 нед.), кордоцентез

Амниоцентез – получение амниотической жидкости (15 – 20 мл.) → пункция амниотического мешка через переднюю брюшную стенку или влагалище (16-20 нед. беременности) → изучение стенок плода в ___________________.

 

Кордоцентез – взятие крови из пупочной вены плода (15-22 нед.) → _____________ лейкоцитов → цитогенетические, молекулярно – генетические, биохимические анализы

Неинвазивные: УЗИ (3 раза: 10-13 нед, 20-22 нед, 30-32 нед.) и биохимия (17-20 нед.)

Биохимический - определение альфафетопротеина, хорионического гонадотропина