Таблица 6. Дифференциация энтеробактерий от некоторых других грамотрицательных микроорганизмов

Примечание. * При росте на твердых питательных средах образуют колонии желтого, оранжевого, красного или коричневого цвета; оттенок пигмента зависит от состава среды и температуры культивирования.

** Кроме F. meningosepticum, дающих отрицательную реакцию.

*** За исключением единичных штаммов Acinetobacter calcoaceticum.

Обозначения: "+" - положительная реакция; - отрицательная реакция; X - разные реакции; O - окисление; F - ферментация.

Микроскопию окрашенных по Граму мазков из сомнительных культур следует считать первоочередной, так как при этом могут быть выявлены особенности (например, кокковая форма), исключающие необходимость использования других тестов. Нечеткие результаты окраски по Граму (у некоторых штаммов микроорганизмов родов Acinetobacter, Moraxella и Bacillus) могут быть уточнены при использовании пробы с KOH. Для этого культуру суспендируют в капле 3-% раствора KOH на предметном стекле. При положительной реакции, свойственной грамотрицательным микроорганизмам, жидкость в капле становится вязкой, нити тянутся за петлей на 0,5-2 см. Учет этой пробы более удобен на черном фоне.

Для постановки OF-теста изучаемую культуру засевают уколом в столбик среды Хью-Лейфсона (одновременно в две пробирки), в одну из которых затем вносят стерильное вазелиновое масло (0,5-1 мл). Посевы делают небольшой петлей, не доводя ее до дна пробирки на 5-6 мм, инкубируют при 37°C в течение 1-4 суток. Изменение цвета среды на желтый в обеих пробирках указывает на расщепление глюкозы путем ферментации (F), появление желтой окраски среды только в открытой пробирке, не залитой вазелиновым маслом, - об окислительном процессе (O), а сохранение исходного неизменного цвета в обеих пробирках - об отсутствии активности в отношении глюкозы (-).

Тест на цитохромоксидазу можно проводить по методу Эрлиха, для чего на поверхность роста 18-20-часовой агаровой культуры наносят каплю 1-% водного раствора диметил-пара-фенилендиамина и добавляют каплю 1-% спиртового раствора альфа-нафтола. При положительной реакции через 1-3 минуты появляется ярко-синее окрашивание. Тест можно воспроизвести также с помощью диска на цитохромоксидазу из коммерческой бумажной индикаторной системы (СИБ) в соответствии с наставлением к нему. Наличие цитохромоксидазы можно выявить по методу Ковача (известен как тест на оксидазу), являющемуся модификацией метода Эрлиха. По методу Ковача на культуру наносят несколько капель 1-% водного раствора тетра-пара-фенилендиамина. При положительной реакции через 20-30 секунд появляется стойкое темно-красное окрашивание.

Тест на редукцию нитратов проводят путем посева одной петли суточной агаровой культуры в питательную среду, содержащую нитрат калия (см. "Питательные среды и реактивы"), и инкубируют при 37°C до 4 суток с ежедневным учетом реакции. Для выявления восстановленных нитритов в пробирку с культуральной жидкостью вносят по 1 мл растворов А и Б (см. "Питательные среды и реактивы"). При положительной реакции через несколько минут появляется красное окрашивание, при отрицательной цвет среды не меняется.

Дифференциация родов

Небольшое число признаков, выявляемых у культур энтеробактерий на этапе первичной идентификации, не позволяет достоверно определить их родовую принадлежность. Обычно по сочетанию биохимических признаков на средах первичной идентификации (на комбинированных) можно заподозрить одновременно несколько (3-6) родов энтеробактерий. В связи с этим для установления родовой принадлежности изучаемой культуры следует провести дифференциацию родов, т.е. использовать соответствующие тесты из минимального дифференцирующего ряда (табл. 7). Конкретный набор тестов определяют с учетом родов, подлежащих дифференциации (табл. 5). При затруднениях в дифференциации прибегают к определению дополнительных признаков у изучаемой культуры, используя данные о биохимических характеристиках родовых групп семейства Enterobacteriaceae (табл. 8).