Системы индикаторные бумажные (СИБ)

Системы состоят из индикаторных бумажек, представляющих собой пропитанные необходимыми для дифференциации субстратами индикаторные диски или полоски хроматографической бумаги, стабилизированные полимерным покрытием. Системы СИБ выпускают в виде наборов разного назначения: набор N 1 (13 наименований) предназначен для идентификации вибрионов; N 2А - малый набор, включающий 9 наименований, - для межродовой дифференциации энтеробактерий. Он позволяет определять ферментацию лактозы, образование сероводорода и индола, утилизацию цитрата и малоната, гидролиз мочевины, дезаминирование фенилаланина, декарбоксилирование лизина и наличие . Набор N 2Б - расширенный, включающий 25 наименований, предназначен для дальнейшей дифференциации энтеробактерий. В него включены, помимо субстратов, содержащихся в наборе N 2А, оркитин, желатин, реактив для определения цитохромоксидазы и широкий набор углеводов. Набор N 3 предназначен для ускоренного определения обсемененности воды E. coli и состоит из двух компонентов, обеспечивающих определение ферментации глюкозы и цитохромоксидазы.

Работа с СИБ требует наличия чистой 18-24-часовой агаровой культуры.

Для определения цитохромоксидазы суточную агаровую культуру растирают петлей на соответствующей индикаторной бумажке, помещенной в чашку Петри. Цитохромоксидазоположительные культуры (не энтеробактерии) вызывают синее окрашивание через 30-60 секунд. Цитохромоксидазоотрицательные - не изменяют окраски.

Образование индола определяют в пробирках с 0,2-0,3 мл ИХН, pH 7,2-7,4, куда вносят полную петлю агаровой культуры и затем стерильным пинцетом опускают в пробирку сложенную вдвое "индольную" бумажку так, чтобы короткий конец, имеющий желтоватую окраску, находился над поверхностью суспензии. Пробирки помещают в термостат на 2 часа, однако положительный результат (красно-малиновое окрашивание) зачастую проявляется уже через 30-40 минут.

Фенилаланиндезаминазу определяют также в микробной взвеси. В пробирку погружают диск с фенилаланином, выдерживают 1 час при 37°C и затем погружают в суспензию другой диск с хлоридом железа. При положительном результате через 10-15 секунд появляется зеленое окрашивание.

Наличие  определяют, помещая в суспензию на 4-8 часов (при 37°C) соответствующий диск. Предварительный учет возможен через 1 час. В случае положительной реакции диск желтеет.

Определение желатиназы проводят также в микробной взвеси, помещая в нее диск засвеченной и проявленной фотопленки, с последующей инкубацией при 37°C в течение 18-24 часов. Предварительный учет возможен через 4-5 часов. При положительной реакции фотопленка просветляется, а на дне пробирки выпадает черный осадок.

Образование сероводорода определяют в чашках Петри на СПА или в пробирках с полужидким агаром (0,4-0,6%). На поверхностях агара в чашке делают посевы петлей в виде площадок (примерно 0,5 ). В полужидкий агар культуру засевают уколом. Индикаторные бумажки помещают на засеянные площадки или на поверхность полужидкого агара в пробирку. Посевы инкубируют 18-24 часа при 37°C. Предварительный учет возможен через 5 часов.

При положительной реакции диски чернеют. В пробирках можно учитывать также и подвижность бактерий.

При определении отношения к аминокислотам, утилизации цитрата и малоната суточную агаровую культуру суспендируют в 0,2-0,3 мл забуференного раствора ИХН с pH 5,4-5,6. В суспензии помещают (стерильным пинцетом) соответствующие индикаторные диски и выдерживают при 37°C 18-24 часа. Пробирки с "аминокислотными" дисками до инкубирования заливают стерильным вазелиновым маслом (0,1-0,2 мл). При положительном результате в тестах с аминокислотами появляется синее или интенсивно зеленое окрашивание. В тестах с цитратом окрашивание малиново-красное, при этом возможен предварительный учет через 5 часов.

Ферментацию углеводов определяют на СПА в чашках Петри или в пробирках, содержащих 0,2-0,3 мл ИХН или 1% пептонной воды. Посевы делают, как уже было сказано ранее. "Углеводные" диски помещают на засеянные площадки агаровой поверхности или в пробирки с микробной взвесью. Для определения газообразования на диск с глюкозой в чашке наносят 4-5 капель расплавленного и охлажденного до 45°C полужидкого (0,6-0,8-%) агара, а в пробирку с "глюкозным" диском помещают маленький кусочек стерильной ваты. Чашки и пробирки выдерживают в термостате при 37°C 5 часов. При положительном результате диски на агаровых культурах изменяют первоначальный красный цвет на желтый, в пробирках среда приобретает желтую окраску. В чашках результаты следует учитывать точно через 5 часов (позднее возможна редукция); в пробирках учет результатов возможен и через 18-20 часов.

Подробности работы с системами СИБ изложены в наставлениях, прилагаемых к наборам.

В отдельных случаях системы СИБ могут давать нечеткие результаты, что зависит, в основном, от ряда нарушений (работа со смешанными культурами, недостаточная концентрация микробных клеток в суспензии, нарушение режима pH, какие-либо отклонения от правил, изложенных в наставлении) и некоторых других факторов.