Таблица 21. Препараты для окончательной серологической идентификации энтеропатогенных эшерихий в реакции агглютинации на стекле

Ответ об обнаружении определенной OK-группы ЭПЭ выдается при наличии реакции агглютинации живой культуры с соответствующим OK-иммуноглобулином или OK-сывороткой и гретой культуры с адсорбированной O-сывороткой. Исключение составляет E. coli 0151, когда положительный отчет выдают по результату агглютинации живой культуры на стекле с адсорбированной сывороткой 0151:K-. OK-иммуноглобулины, как более специфичные препараты, следует использовать взамен отдельных OK-сывороток. При наличии необходимого ассортимента иммуноглобулинов серологическую идентификацию ЭПЭ проводят с этими препаратами после получения положительного результата в какой-либо из поливалентных сывороток (или поливалентных иммуноглобулинов), исключая этап "ориентировочного положительного результата" с OK-сывороткой.

При отсутствии OK-иммуноглобулинов и адсорбированных O-сывороток для реакции агглютинации на стекле определение OK-группы эшерихий проводят обычным способом при помощи OK-сывороток в пробирочной реакции агглютинации с живой и прогретой (при 100°C - 1 час) культурами. Для постановки пробирочной реакции агглютинации в объеме 1 мл делают два ряда возрастающих двукратных разведений сывороток в стерильном ИХН, начиная о разведения 1:50 до O-титра, указанного на этикетке, не принимая во внимание титр K-антител. Во все пробирки первого ряда вносят по 1 капле взвеси живых бактерий в ИХН, а второго ряда - по 2 капли той же взвеси бактерий, предварительно прогретой и охлажденной.

Контролем антигенов являются взвеси живых и прогретых бактерий в пробирках с ИХН в том же объеме, что и в разведениях сыворотки. Учет результатов проводят через 18-20 часов инкубации при 37°C невооруженным глазом (живая культура) и в агглютинскопе (прогретая культура). Для живой культуры характерно образование крупнохлопчатого K-агглютината, для прогретой - мелкозернистого O-агглютината. Результат оценивают как положительный при одновременном наличии K-агглютината до титра или половины титра K-антител, указанного на этикетке, а также O-агглютината до титра или половины титра O-антител, указанного на этикетке, либо O-агглютината в обоих рядах пробирок до титра или половины титра O-антител. Последнее указывает на отсутствие K-антигена (E. coli 0151:K-) или на его потерю у штамма, принадлежащего к определенной серогруппе.

После установления OK-серогруппы у подвижных штаммов E. coli определяют серовар по H-антигену. Штаммы, предварительно пассированные на полужидком агаре в пробирке Крейджи*(4), могут быть испытаны двумя способами: в реакции агглютинации на стекле и методом иммобилизации в полученном агаре в пробирках. В обоих случаях используют коммерческие H-сыворотки, которые выпускают для метода иммобилизации. Вначале применяют поливалентные, при положительном результате - моновалентные H-сыворотки, входящие в смесь. В реакции агглютинации на стекле используют взвесь культуры, выросшей на глицериновом агаре после пассажа в пробирке Крейджи. Для получения взвеси в пробирку наливают ИХН (до верхнего края скошенного глицеринового агара), осторожно смывают культуру бактерий, вращая пробирку между ладонями. Каплю взвеси бактерий пипеткой вносят в каплю сыворотки на стекле и смешивают при покачивании. Образование агглютината указывает на положительный результат.

Для постановки реакции иммобилизации среду готовят заранее: сыворотку смешивают с предварительно растопленным и охлажденным до 45-50°C полужидким (0,3-%) СПА в соответствии с наставлением по применению препаратов. Не допуская застывания, среду разливают по 2,5 мл в стерильные пробирки. Для контроля стерильности пробирки со средой помещают в термостат на 48 часов при 37°C. Стерильная среда может быть использована для работы (при сохранении ее в холодильнике) в течение месяца. Культуру подвижных штаммов (с верхнего слоя полужидкого агара в пробирке Крейджи) засевают уколом в пробирки с приготовленной средой, инкубируют (20-37°C) в течение 18-20 часов. При соответствии H-антигена испытуемого штамма и H-сыворотки бактерии растут вдоль линии укола (положительный результат). При несоответствии H-антигена и H-сыворотки наблюдают рост в виде диффузного помутнения среды в пробирке (отрицательный результат). В случаях определения H-антигена у слабоподвижных штаммов проводят многократное пассирование на полужидком агаре в пробирках Крейджи, после чего определяют H-антиген по указанной методике. Антигенно-диагностическая схема известных ЭПЭ представлена в табл. 22.

Таблица 22 Антигенно-диагностическая схема известных разновидностей энтеропатогенных эшерихий

Примечание: * Неподвижные штаммы (H-) могут быть и в других серогруппах и являются самостоятельными сероварами.

** Объединены обе разновидности - 0128ab:K67 и 0128ac:K67.

Во всех случаях, включая поиск возбудителей парентеральных эшерихиозов, исследование проводят обычным бактериологическим методом, начиная с определения вида E. coli по биохимическим признакам с последующим серологическим типированием.

Среди культур, выделяемых при этом, могут быть штаммы с K-антигеном типа A, который не разрушается при кипячении. Поэтому в случае O-инагглютинабельности бактерий после кипячения их следует автоклавировать при 120°C в течение 2,5 часа, после чего повторно испытывать в реакции агглютинации с O-сыворотками. Серологическое типирование эшерихий, не относящихся к ЭПЭ, проводят по O- и H-антигенам в соответствии со схемой (табл. 23) и при наличии диагностических препаратов.