2020-06-29
77
И ОБЩЕГО БЕЛКА В КРОВИ
Цель занятия Овладеть техникой определения 
глюкозы и 
щего белка в крови, научиться давать диагностическую оценку результатам исследования
Материальное обеспечение. 
рефрак-
тометр, водяная баня шкаф, мерные колбы (на 100 мл и 1 л), градуированные и пипетки (на ОД, 1, 2 и 5 мл), 
л обычные дробарки, кровь (с антикоагулянтам) и сыворотка крови
Реактивы для определения билирубина кофеиновый реактив (5 г хими- чески чистого 
7,5 г бензоата натрия, 12,5 г ацетата натрия, дистил-
воды до 100 мл), 
натрия,
(диазореактив 5 г кислоты растворяют при подогре- вании в 400 мл дистиллированной воды, добавляют 15 мл
соляной кислоты и доводят водой до 1 л, 
г нитрита нат- рия и воды до 100 мл перед работой смешивают 10 мл диазореактива I и 0,3 мл диазореактива II), 
гидрокарбонатного 
(60 гидрокар- боната натрия, 0 3 г хлористого натрия, 25 мл дистиллированной воды и 75 мл этилового 
билирубин, 
Реактивы для определения глюкозы о 
в колбе ре- торте на песочной бане 200 хранят в посуде из темного стекла без до- ступа воздуха), ледяная 
раствор трихлоруксусной кислоты, тиомочевина, о реактив (94 мл ледяной уксусной кис-
0,15 г и 76 мл о толуидина, хранят в
дартный раствор (500 мг глюкозы, высушенной
при 100 растворяют в 100 мл 0,2% ного раствора бензойной кислоты, хра- нят в рабочий стандартный раствор глюкозы (к 1 мл основ- ного раствора глюкозы 4 мл дистиллированной воды, готовят в День исследования, в 1 мл содержится 1 мг глюкозы)
Определение содержания билирубина в сыворотке крови (по Ендрашику, 
и Грофу). В три пробирки вносят по 0,5 мл сыворотки, разведенной в 2 раза 0,9 % раствором хлористого натрия, а затем в первую пробирку (контроль) до- бавляют 1,75 мл кофеинового реактива и 0,25 мл 
раствора хлористого натрия и колориметрируют, во вторую про- 
(прямой билирубин) вносят 
мл 0,9 % ного раствора
181
хлористого натрия и 0,25 мл диазосмеси, колориметрируют че- рез 5 мин (в течение 5 
в третью пробирку (общий били- рубин) вливают 1,75 мл кофеинового реактива и 0,25 мл диазо- смеси, колориметрируют через 20 мин. Колориметрирование проводят при зеленом светофильтре в 5 мм кюветах против дистиллированной воды.
Из показателей оптической плотности, полученных при следовании прямого и общего билирубина, вычитают показа- тель оптической плотности контроля.
По 
графику находят содержание общего и прямого билирубина (мг/100 мл, или ммоль/л), а по разнице между количество непрямого билирубина (мг/100 мл, или
Методика построения калибровочного графика следующая. В мерную колбу вносят 10 мг чистого билирубина и добавляют хлороформа до 100 мл (в 1 мл раствора содержится 0,1 мг билирубина). В пробирки отмеривают раствор 
в 
0,05; 0,1; 0,15; 0,2; 0,25; 0,3. Содержание
билирубина в этих пробирках будет соответственно (мг): 0,005; 0,01; 0,015; 0,02; 0,025 и 0,03. Содержимое трех последних про- бирок выпариванием на горячей водяной бане доводят до объема мл. После этого в каждую пробирку добавляют 
мл спирта, до 2,5 мл чистого этилового спорта, 0,5 мл диазосмеси, а через 15 2 мл кофеинового реактива (общий объем 5 мл) и сразу колориметрируют против воды.
По оси ординат откладывают показатели оптической плот- ности, а по оси 
количество билирубина. Чтобы дать эти показатели в миллиграммах (на 100 мл), количество били- рубина в каждой пробирке умножают на 200 из расчета, что для анализа берется 0,5 мл сыворотки. Первая пробирка соот- ветствует 1 мг, 2, 3, 4, 5
и 6 мг билирубина на 100 мл сыворотки, или 17,1; 34,2; 68,4; 85,5; 102,6 мкмоль/л. Разведение сыворотки в
2 раза не учитывают, так как объем стандартных проб в 2 раза больше по сравнению с исследуемыми.
Содержание билирубина в сыворотке здоровых животных составляет (мг/100 мл): у общего билирубина 
0,48, прямого билирубина нет; у телят до 15-дневного воз- общего билирубина у ло-
общего билирубина
(по Н. А. у общего билирубина пря- у общего билирубина у кур —
(по Л. Шлезингеру).
Для пересчета концентрации билирубина в единицы СИ (мкмоль/л) количество билирубина, выраженное в 
182
мах на 100 мл, умножают на Количество общего били- рубина в сыворотке составляет у 
у телят до 15-дневного общего билирубина
у общего билиру-
бина у общего били-
у общего били-
рубина у кур —
Повышение содержания в сыворотке непрямого билирубина
регистрируют при гемолитических жел-
тухах, обусловленных (пироплазмоз, бабе-
зиоз, нутталиоз) и (кровопятнистая болезнь и др.) болезнями, отравлениями гемолитическими ядами, введе- нием несовместимой 
Повышенную концентрацию прямого билирубина в сыво- ротке крови встречают при механической желтухе (закупорка желчных путей желчными камнями, паразитами, сдавливание их опухолями, увеличенными лимфатическими узлами, абсцессами, эхинококками, сужение вследствие рубцового стягивания, вос- паления слизистой двенадцатиперстной 
Увеличение количества прямого и непрямого билирубина в связано с паренхиматозной желтухой (при инфек-
ционной анемии, контагиозной плевропневмонии, мыте, инфек- ционном энцефаломиелите, лептоспирозе, острых и хронических гепатитах, токсической дистрофии печени, отравлении фосфором идр.).
Определение содержания глюкозы в крови с 
сахар и глюкозу устанавливают методами Сомоджи (с сульфатом меди) или 
(с пероксидазой и глюкозо- 
Близкие значения к данным этих методов дает определение глюкозы с о-толуидином.
Для постановки реакции в 
вносят 0,9 мл 3 
раствора трихлоруксусной кислоты и 0,1 мл крови. Смесь цент- рифугируют в течение 10 мин при 3000 
К 0,5 мл прозрач- ного центрифугата прибавляют 4,5 мл 
реактива и пробирку выдерживают на кипящей водяной бане точно 8 мин. При истечении указанного срока пробирку охлаждают водопро- водной водой под краном и колориметрируют на фотоэлектроко- лориметре при длине волны 
нм (оранжевый или красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против холостого опыта, сущность которого в следующем. К 0,5 мл 3 %-ного рас- твора трихлоруксусной кислоты добавляют 4,5 мл о-толуидино- вого 
тщательно смешивают и нагревают на кипящей водяной бане в течение 8 мин. Стандартную пробу готовят так же, как и опытную, но в первую вместо сыворотки берут 0,1 мл рабочего стандартного раствора глюкозы (концентрация 100 мг на 100 мл, или 5,55 ммоль/л).
183
глюкозы в опытной пробе 
мг/100 мл, ищи ммоль/л) рассчитывают по формуле
 |
где концентрация глюкозы в стандарте (мг/100 мл, или ммоль/л); плотность пробы; 
оптическая плотность стандарта.
У здоровых взрослых животных содержание глюкозы в кро- ви находится в пределах (мг/100 у крупного рогатого ско-
собак у кур
При умножении количества глюкозы (мг/100 мл) на 0,0555 получают концентрацию ее в единицах СИ (ммоль/л). Содер- жание глюкозы составляет у крупного рогатого скота овец свиней лоша-
собак у
Увеличение содержания глюкозы в крови (гипергликемию) наблюдают при сахарном диабете, поедании большого количе- ства сахара, стрессах, гиповитаминозах 
и С, почечной недо-
статочности, нефрите и т. д.
Уменьшение количества глюкозы в крови (гипоглике- мия) может быть при голодании, диспепсиях, А-ги- повитаминозе, лейкозе, гипо- функции щитовидной
остром поражении печени
и т. д.
Определение общего белка в сыворотке крови рефракто- метрическим методом. Для определения общего белка в сыворотке крови пользуются рефрактометрами различного типа 
ИРФ-22,
ИРФ-23, РЛУ, РЛ, РПЛ 
При работе на рефракто- метре РЛУ (рис. 59) вначале проверяют нулевую точку, для чего на поверхность измери- тельной призмы наносят
2 капли дистиллированной
воды; лупу шкалы и оку- ляр зрительной трубки уста-
Рис. 59. Рефрактометр РЛУ навливают на резкость
184
(в поле зрения должны быть хорошо видны шкала и визирные 
устраняют дисперсию в окуляре зрительной трубки вра- щением рукоятки дисперсионного компенсатора; линию, имею- щуюся на лупе шкалы, устанавливают на делении 1,3333, а гра- ницу светотени совмещают с точкой пересечения визирных ли- ний с помощью ключа.
После подготовки прибора раскрывают его камеру, проти- рают верхнюю и нижнюю призмы фильтровальной бумагой, а затем мягкой салфеткой. На поверхность нижней призмы на- носят 
капли сыворотки, 
закрывают, направляют зеркалом свет в ее окно и поворачивают камеру до тех пор, пока граница светотени не установится в точке пересечения визирных линий, и по шкале проводят отсчет показателя пре-
5. 
Коэффициенты преломления сыворотки крови и соответствующие им количества общего белка
| Показа- тель рефрак- тометра | Показа- тель рефрак- тометра |   мл
| Показа- тель рефрак- тометра | Показа-
рефрак- тометра
| Белок,
  мл
|
1,3427
1,3431
1,3435
1,3439
1,3446
1,3450
1,3454
1,3458
1,3460
1,3462
1,3464
1,3465
1,3466
1,3468
1,3469
1,3470
1,3472
3,94
4,16
4,38
4,60
4,81
5,03
5,25
5,47
5,68
5,92
5,97
6,02
6,07
6,12
6,18
6,23
6,29
6,34
6,40
6,45
6,50
 |
6,93
7,04
1,3481
1,3482
1,3483
1,3484
1,3485
1,3486
1,3487
1,3488
1,3489
1,3494
1,3495
1,3496
1,3497
1,3500
1,3501
1,3502
 |
1,3510
7,10
7,15
7,20
7,25
7,31
7,36
7,42
7,48
7,54
7,59
7,63
7,68
7,73
7,79
7,83
7,91
7,96
8,06
8,12
8,17
8,23
8,28
8,71
8,76
1 3511
1,3512
1,3513
1,3514
1,3515
1,3516
1,3517
1,3518
1,3519
1,3520
1,3521
1,3522
1,3523
1,3525
1,3527
1,3528
1,3529
1,3531
|
 |  |
1,3540
8,82
8,87
8,92
8,97
9,03
9,08
9,14
9,20
9,26
9,35
9,41
9,46
9,51
9,57
9,63
9,68
9,73
9,84
9,89
9,94
9,99
10,39
10,44
,3541
,3542
,3543
,3544
,3545
,3546
,3547
,3548
,3549
,3550
,3551
,3552
,3553
,3554
,3556
,3557
,3558
,3559
,3561
1,3562
1,3569
1,3570
10,49
10,54
10,60
10,64
10,75
10,80
10,88
10,98
11,04
11,09
11,21
11,26
11,30
11,37
11,42
11,47
11,52
11,57
62
11,77
11,87
11,98
12,04
185
сыворотки. Пользуясь данными таблицы 5, по вели- чине коэффициента преломления находят содержание белка. У здоровых животных содержание общего белка в сыворотке находится в следующих пределах (г/100 мл): у крупного рога- того сви-
у или
у крупного рогатого
свиней собак у кур
Уменьшение концентрации общего белка в сыворотке крови 
встречают при низком содержании белка в рационе, несбалансированности рациона по аминокислотному составу, острых и хронических кровотечениях, гидремии, бере- менности, нефротическом отеке, паренхиматозном гепатите, цир- розе печени, абсцессах, злокачественных
паратуберкулезе (у клинически больных терминаль- ной форме туберкулеза, затяжном сепсисе, тейлериозе, лихора- дочных состояниях, интоксикациях и т. д.
Увеличение содержания общего белка в сыворотке 
наблюдают при концентратном типе кормления, избытке переваримого протеина и недостатке легкорастворимых углеводов, дегидратации, рвоте, тяжелых формах диареи, диа- бете, гепатите (в стадии 
каротина в кормах, неправильном соотношении кальция и фосфора, не- достатке витамина D, острых воспалениях, флегмонах,
тяжелых инфекционных и других болезнях.
Заняти е 30 ОПРЕДЕЛЕНИЕ В КРОВИ 
