ГЕМОГЛОБИНА В ОДНОМ ЭРИТРОЦИТЕ
Цель занятия. Овладеть методикой количества
в крови, научиться вычислять цветовой показатель; приобрести навыки диаг- ностической оценки данных анализов.
Материальное обеспечение. мерные
на 1 л, градуированные пипетки на 5 мл, капиллярные пипетки на (0,02 пробирки; (с 0,1 н. раствор соля- кислоты, трансформирующий раствор (0,5 мл 200 мг
1 г гидрокарбоната до 1 л дистиллиро- ванной воды, стандартный гемиглобинцианида венгерской фирмы
(концентрация 59,75 мл, что соответствует 15 г гемоглобина на 100 мл крови, или 150 г/л).
Определение содержания гемоглобина в крови. Применяют и методы.
мето д В градуиро-
ванную пробирку гемометра (рис. 60) вносят глазной
186
Рис. 60 Схема гемометра ГС-3:
— корпус стойка; 2 — крышка; 3 — два винта;
4 — две запаянные пробирки со стандартной жидко- стью- 5 — градуированная пробирка, 6 — матовое
|
пипеткой до метки «2» 0,1 н. раствор соляной кислоты. Капиллярной пипет-
кой набирают 20 мкл (0,02 мл) кро- ви, кончик пипетки вытирают ватой и кровь осторожно выдувают на дно пробирки в раствор кислоты, промы- вая им раза пипетку для удале- ния остатков крови. Перемешивают и оставляют стоять на 5 мин (при ис- следовании крови на 15 мин). Вследствие образования солянокис- лого гематина (хлоргемина) раствор в пробирке приобретает коричневую
окраску. Добавляют по дис-
тиллированную воду, помешивая стек- ' ' лянной палочкой до тех пор, пока
окраска жидкости в пробирке не сравняется с цветом стандарт- ных пробирок. Количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови устанавливают по делению шкалы, которое совпадает с уровнем жидкости в пробирке. Если найденное по шкале гемометра количество гемоглобина умножить на коэффи- циент 10, то можно определить концентрацию гемоглобина
мето д (мето д М. Л. Пи-
м е н о в о й и Г. В. Для исследования используют опытную, холостую и стандартную пробы.
пробу ставят следующим образом. К 5 мл транс- формирующего раствора добавляют 20 мкл (0,02 мл) крови (разведение в 251 раз), тщательно размешивают, оставляют на
10 мин и затем колориметрируют при зеленом светофильтре (длина волны нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против холостой пробы. В качестве последней берут трансфор- мирующий раствор. Стандартная это стандартный рас- твор гемиглобинцианида, который исследуют без разведения трансформирующим раствором так же, как и опытную пробу. Содержание гемоглобина г/100 мл) по фор-
муле
F '
где — оптическая плотность опытной пробы; — оптическая плотность пробы; в стандартном рас-
187
(59,75 мл); К — коэффициент крови (251); 0,001 — коэффициент для (для в полученное по формуле количество гемоглобина умножают на
У здоровых животных содержание гемоглобина крови со- ставляет (г/100 у крупного рогатого скота —
овец — лошадей — свиней — собак— у кур
Содержание гемоглобина находится в пределах у круп- ного рогатого скота — овец — коз —
лошадей — свиней — собак — у кур —
Увеличение количества гемоглобина в крови наблюдают при поносах, рвоте, потливости, образовании экссудатов и транссудатов, миоглобинурии, эмфиземе легких. Уменьшение содержания гемоглобина в крови встречают при анемиях различной этиологии.
Определение цветового показателя. При заболеваниях может изменяться насыщенность эритроцитов гемоглобином, что учи- тывают определением цветового показателя который вы- числяют по формуле
где — среднее количество гемоглобина в норме (г/100 мл, или г/л); количество гемоглобина у исследуемого животного (г/100 мл, или г/л); количество в норме (млн/мкл, или EZ — ство эритроцитов у животного или
Цветовой показатель крови у здоровых животн у крупного рогатого овец —
лошадей свиней
1,2; у
Отклонение цветового показателя на % и более от нормы свидетельствует о состава крови, что учитывают при дифференциальной диагностике анемий.
Повышение цветового показателя регистри- руют при гемолитических анемиях. Понижение цветового пока- зателя отмечают при ане- миях.
Заняти е 31
ПОДСЧЕТ КЛЕТОК КРОВИ
Цель занятия. Овладеть методикой подсчета количества эритроцитов, лей- коцитов и тромбоцитов.
Материальное обеспечение. счетные камеры Горяева, шлифо- ванные покровные стекла, для и
188
торные пробирки с пипетки, градуированные на 1 и 5 мл;
Сали; натрия, жидкость Тюрка,
раствор трилона Б (50 г 50 мл раствора формаль- дегида, 450 мл раствор (90 г хлорида натрия, химически 5 г трилона Б, 15 мл раствора ного формальдегида, 10 л дистиллированной воды); раствор сапонина.
Подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Для подсчета количества указанных клеток крови используют счетные камеры и электронно-счетные приборы. Число эритро- цитов можно определить также с помощью и фотоэлектроколориметров.
Подсче т л е й к о ц и т о в и цито в в счетно й При подсчете числа клеток крови применяют различные счетные камеры (Горяева, Пред- теченского, Бюркера, бауера, Тюрка и др.). Наибольшее распространение получила счетная камера Горяева.
Счетная это толстое предметное стекло с четырьмя поперечными между которыми образуются три по- перечные полосы. Средняя полоса на 0,1 мм тоньше боковых и разделена продольным желобком на две равные половины, на каждой из которых выгравирована сетка Горяева (рис. 61). Если на боковые полоски наложить и притереть шлифованное покровное стекло появления радужных то над сред- ней полоской образуется пространство
той 1/10 мм.
Сетка Горяева
9 (3X3 мм),
имеет площадь на ней нанесены
225 больших квадратов
25 из которых разделены
(15X15),
на 16 ма-
леньких квадратиков Пло- щадь маленького квадратика состав- ляет 1/400 мм), а
объем камеры над (1/400 мм).
При эритроцитов кровь
разводят разбавите-
лем — или в меланжере, или смесителе (рис. 62) для эритроцитов; чаще прак- тикуется пробирочный метод по Н. Николаеву (1954). Если кровь
Рис 61 Счетная камера Горяева
1 — сверху, 2 — вид сбоку, 3 — сетка Горяева,
— малый и 5 — большой квадраты
189»
разводят в меланжере, то в капилляр его набирают кровь метки «0,5», кончик капилляра протирают ваткой и затем в смеситель до метки «101» разбавляющую жид- кость или раствор хлористого натрия;
5 раствор цитрата натрия; раствор йода: йод кри- 0,3 г, калия 0,4 г, натрия цит-
2 г, дистиллированная мл). Смеситель с обоих концов закрывают большим и средним пальцами руки и встряхивают мин. В данном случае получается разведение крови Из меланжера вначале удаляют на ватку первые три капли разведенной крови, а последующую каплю наносят на среднюю полоску счетной камеры вблизи от края притертого покровного стекла. Капля разведенной крови попадает под стек- ло в пространство и заполняет камеру.
Если кровь разводят в пробирке, то в пробирку Флоринского берут 4 мл или раствора хлористого нат- рия, вносят 0,02 мл крови пипеткой от гемометра Сали (разве- дение крови 1 и смешивают. Пастеровской пипеткой наби- рают разбавленную кровь и заряжают счетную камеру. Выждав мин, подсчитывают эритроциты под микроскопом при объекте и окуляре в левом верхнем большом квадрате (разделенном на 16 маленьких а затем еще в че- тырех больших квадратах по диагонали сетки (всего в пяти
квадратах).
Подсчет клеток в большом квадрате начинают с левого верх-
него маленького квадратика, а да- лее переходят во второй, третий и четвертый квадратики (рис. 63). После верхнего ряда считают эрит- роциты в нижерасположенном ряду,
Рис. 62 Смесители Рис. 63. Подсчет эритроцитов в боль- J - для эритроцитов; 2 - для лейкоцитов шом квадрате счетной камеры Горяе-
ва
начиная с первого правого квадратика, и т. д. Эритроциты внут- ри маленьких квадратиков, а также на верхней и левой сторонах большого квадрата считают, а эритроциты на нижней и правой сторонах не учитывают.
Количество эритроцитов (X, в 1 мл крови) определяют по
формуле
ВГ 80
где А — число эритроцитов, подсчитанное в пяти больших квадратах (напри- мер, Б — разведения крови (200); маленьких квадратиков в пяти больших квадратах Г — счетной каме- ры маленьким квадратиком (3/4000
Число эритроцитов в 1 л крови вычисляют по формуле
При подсчете лейкоцитов в меланжер для лейкоцитов наса- сывают кровь до метки «0,5», а затем до метки «11» набирают жидкость Тюрка (3 раствор уксусной мл,
1 %-ный раствор генциана фиолетового или метиленового сине- 1 мл). Встряхивают 2 мин. Уксусная кислота разрушает эритроциты, а генциан фиолетовый (или синий) окрашивает лейкоциты. Получают разведение крови 1 Пер- вые три капли выпускают на ватку (или фильтровальную бу-
а следующей каплей заполняют счетную камеру.
Для разведения крови в пробирке берут 0,4 мл жидкости Тюрка и 0,02 мл крови пипеткой от гемометра Сали (разведение крови 1 Пастеровской берут смесь и заряжают счетную камеру. Через мин после оседания лейкоцитов на дно камеры начинают подсчет клеток, который проводят под микроскопом при объективе Х8 и окуляре в 100 больших квадратах, не имеющих дополнительных линий и расположен- ных по сетке Горяева группами по четыре квадрата.
Количество лейкоцитов (X, в 1 мкл крови) определяют по формуле
ВГ 1600 2
где Л — число лейкоцитов, в 100 больших квадратах (например, Б — степень разведения крови (20); В — количество маленьких квадра- тиков в 100 больших квадратах Г — объем счетной камеры маленьким квадратикам (1/4000 мкл).
Для числа лейкоцитов в 1 л крови используют формулу
Для подсчета тромбоцитов (по Хауке) в шприц емкостью
1 мл берут 0,5 мл 1 раствора трилона Б и 0,5 мл веноз- ной крови, смешивают (разведение и сразу переносят в силиконированную пробирку, которую закрывают пробкой.
-Кровь в пробирке до подсчета может несколько часов.
Перед подсчетом кровь в пробирке смешивают, набирают в меланжер для лейкоцитов до метки «1», а затем до метки «11» насасывают 1 раствор оксалата аммония (разведение крови Смешивают и меланжер оставляют на 20 мин (идет гемолиз Меланжер встряхивают мин, выпускают на ватку три капли смеси, а следующей заряж.ают счетную камеру, которую ставят на 10 мин во влажную камеру (чашка Петри с влажной ваткой) для оседания тромбоцитов «а дно камеры. Тромбоциты подсчитывают в пяти больших квадра- тах, разделенных на 16 маленьких квадратиков, при объективе Х40, окуляре Х7 и синем светофильтре.
Число тромбоцитов (X, в 1 мкл крови) считают по формуле
ВГ 80
А — тромбоцитов, в пяти больших квадратах (крови В — малень-
ких в пяти больших квадратах камеры над маленьким квадратиком (1/4000 мкл).
счетной
Число тромбоцитов в 1 л крови определяют по формуле
Подсче т эритроцито в и лейкоцито в с мощь ю счетчико в
В нашей стране используют приборы: шведской фирмы типа модели 101, 202, 302, 401;
французской фирмы Франсе С. А.» типа модели и немецкий ЦГ2; венгерской фирмы
типа отечественного производства типа а также ЦМК-2
(рис. 64,
Изменения количества клеток крови. Число эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в крови у разных видов животных приведено в таблице 6.
Повышенное содержание эритроцитов
встречается сравнительно редко, что свя- зано с потерей организмом воды при обильном потении, поно- сах, образовании транссудатов и экссудатов плевриты, перитониты, водянка грудной и брюшной полостей), кишечника (механические а также хронической альвеолярной эмфиземе легких, при декомпенса- ции сердца.
Уменьшенное содержание эритроцитов в крови
регистрируют при анемиях, обусловлен- ных недостаточным или неполноценным кормлением (особенно
Рис. 64. Схема устройства кондуктометрического датчика:
— пробирка; 2 — микроотверстие; 3 — стакан с пробой; 4 — источник
5 и электроды; управляющий кран; 8 —
ник разрежения; 9 расширение для ртути; 10, 11, 12 — контакты; 13 —
ный сосуд
Рис. 65. Кондуктометрический счетчик частиц «Целлоскоп> (модель 302)
Заказ № 1227