М/б диагноз Staph. Выдел-е Staph, опред-е патогенности, чувств-ти к антибиотикам, фаготипир-е

М/б диагн-ка включают 3 этапа: I – мазки на стеклах и первичный посев; II – изуч-е культур св-в выросших Staph и пересев для накопления чистой культуры; III – видовая идентиф-я и опред-е чувств-ти к антибиот-м.

Микроскопия – мазки окрашивают по Граму.

Выдел-е возбуд-ля – посев проводят на КА, солевые агары (на них рост сопутств флоры угнетает NaCl). На солевом агаре проявл-ся способ-ть к пигментообраз-ю и разлож-ю лецитина. Через 18-24 час S aureus образует гладкие, выпуклые, мутные колонии 4 мм, желтого цвета. На КА вокруг колонии зона гемолиза. В желатине через 24-28 час – рост по ходу укола с воронкой. На желточно-солевом агаре колонии Staph с ферментом лецитиназо й окружены радужным венчиком (S aureus, S xylosus).

Для внутривид диффер-ки S aureus применяют коагулазный тест (на наличие свертыв фактора), у 95% - (+). Есть ещё несколько дифференцир признаков: способ-ть фермент-ть маннит, лецитин (радужный венчик), синтез-ть ДНК-азу, агглютинировать эритроциты барана.

Фаготипиров-е проводят для внутривид диффер-ки S aureus, используют международный набор типовых бактериофагов, с помощью кот-х можно выявить наиболее эпидемиологически опасные штаммы.

Прим-ют электрофоретич метод внутривид типирования Staph по спектрам образуемых ими внеклет белков. Для фаготипиров-я используют набор из 23 бактериофагов. 1 штамм бактерий может лизировать 1 фаг или сразу несколько. Признак стабильный, с его помощью можно типировать до 80% изолятов. При внутрибольничн вспышках обнаруж-ют особые эпидемич штаммы (фаговары 80 и 77).

Методы опред-я чувствит-ти к антибиотикам - значит часть изолятов S aureus либо синтезирует β-лактамазу, либо её синтез индуцируют β-лактамные антибиотики; и 85-90% штаммов может быть резистентно к этим лекарствам. Для опред-я чувствит-ти используют метод дисков или серийных разведений. Метод дисков - метод диффузии в агар с примен-ем бумажных дисков с антибиотиками. Это - качеств метод. Прост в исполнении, основной для практич лабор-й. Метод развед-я антибиотика в плотной или жид питат среде – более точный количеств метод. Применяют в особо важных практич случаях и исследоват работе.

Стрептококки, морфол, культур св-ва, Аг-строение. Серол класс-я. Ф-ры патогенности. Особ-ти патогенеза. Хар-ка пневмококков.

По гемолитич активности на агаре с кровью барана Strept делятся на 3 группы: α – частичный гемолиз и позеленение среды; β – полный гемолиз; γ – визуально гемолиз не обнаруж-ся. Осн возбуд-ль чел-ка – β-гемолитич Strept. Strept – неподвиж сферич клетки 2 мкм. В мазках – парами или корот цепочками. Клет/стенка содержит тейхоевые к-ты, углеводы и пептидогликаны, на её поверх-ти – фимбрии, у патогенн видов есть капсула. В неблагопр условиях - L-формы. Хар-но: каталаза(-), лизируют эритроциты (многие). Хемоорганотрофы с бродильным типом метаболизма: сбраживают глюкозу с образ-ем мол к-ты. Не синтез-т аминок-ты, пурины, пиримидины, витамины. Растут на средах с глюкозой, сыв-кой, кровью. t роста 37º. Факультат анаэробы. На КА – мелкие сероватые колонии, у капсульных - мукоидные колонии. На жид средах – придонный, поднимающийся по стенке рост, пленки нет.

Серолог класс-я - основана на наличии группоспециф углеводов (С-полисахаридов) в клет/стенке. В соотв-и с этим выделяют 17 серогрупп (А-О). Внутри групп – раздел-е на серовары по специф-ти белковых М-, Р-, Т-Аг. Зеленящие Strept и пневмококки лишены групповых Аг, поэтому не включены в серологич группы. У Strept А (пиогенный) белок М - суперантиген, важно при развитии иммунопатологич состояний.

Ф-ры патогенности - I этап инфекц процесса – адгезия микроба к эпителию слизистых. Осн адгезины – липотейхоевые к-ты на фимбриях, гиалуронидаза, стрептокиназа, стрептодорназа.

Белок М – осн фактор вирулентности и типоспецифич Аг. Ингибирует фагоцитар р-и, проявляет св-ва суперантигена, вызывая активацию лимфоцитов и образ-е АТ.

Капсула – защищает бактерии от фагоцитов, облегчает адгезию к эпителию. Образ-на гиалуроновой к-той, такой же, как в составе соедин/ткани. Поэтому капсула не распознается как чужеродный агент.

С5а-пептидаза – подавляет активность фагоцитов.

Стрептолизин-О – разрушает эритроциты в анаэроб условиях. Стрептолизин-S устойчив к О₂, не имеет Аг-нагрузки, вызывает поверхностный гемолиз на кровяных средах. Оба фермента разрушают не только эритроциты, но и др клетки (кардиомиоциты, фагоциты).

Эритрогенные токсины – суперантигены: митогенное д-е, ↑ секрецию макрофагами интерлейкинов.

Кардиогепатич токсин – поражает миокард, диафрагму, печень.

Экзоферменты – стрептокиназа (фибринолизин), гиалуронидаза, стрептодорназа.

Особ-ти патогенеза: гематогенное диссеминиров-е, АТ оказывают протективное д-е.

Морфология пневмококков - овальные кокки 1 мкм. В мазках - парами, пара окружена толстой капсулой. Под капсулой - М-белок. Грам (+), неподвижны, спор не образуют. Не синтез-ют аминок-ты, пурины, пиримидины, вит. Поэтому растут на средах с кровью или сыв-кой. t 37º. Факультат анаэробы. Каталаза (-). Стимулирует рост глюкоза, СО₂ . На плот/средах - колонии 1-2 мм, с α-гемолизом (приподнятый край и центр – «блюдце»), прозрачные и влажные. Атипичные штаммы растут в виде шерохов колоний (R-форма, при потере капсулы). На жид/средах – помутнение. Б/х св-ва: расщепляют лактозу с образ-ем мол к-ты. Образуют О-стрептолизин. Отличит св-во – ферментируют инулин.

Ф-ры патогенности - капсула и субстанция С. Капсула – защищает бактерии от фагоцитов и д-я опсонинов. Некапсулиров штаммы – авирулентны. Субстанция С – тейхоевая к-та клет/стенки, содержит холин и взаимод-ет с С-реакт/белком. В рез-те активир-ся комплемент и освобож-ся медиаторы остр/фазы воспал-я. 

Капсульный Аг – типоспецифич, использ-ся в диагн-ке, при создании вакцин. Субстанция С – видоспецифич Аг. Есть ещё 2 Аг: М-протеинов Аг (типоспецифич белок) и R-протеинов Аг (выделен из шерохов штаммов). Отличия пневмококков от др Strept - для дифф-ки используют тест чувств-ти к оптохинону – угнетает рост 100% изолятов. От зеленящих Strept пневмококки отлич-ся способ-ю фермент-ть инулин, чувствит-ю к солямжелчных к-т (дезоксихолатная проба) – в их присутствии пневмококки лизируются.