2020-07-12
244
После наступления множеств овуляций проводят осеменение коров-доноров. Для осеменения доноров используют сперму выдающихся быков-производителей, проверенных по качеству потомства и признанных улучшателями продуктивности. После гормональной обработки доноров у них с помощью быков-пробников выявляют половую охоту не менее 2 раза в день. Осеменение животных, у которых обнаружена охота, проводят несколько раз с 12-часовыми интервалами до ее окончания, иногда ее повторяют 3-4 раза. Вкаждой дозе спермы должно быть не менее 40-50 млн. живых подвижных спермиев. При этом используют способ осеменения с ректальной фиксацией шейки матки, сперму вводят в ее канал.
При использовании свежей спермы достигается более высокая степень оплодотворяемости. Нецелесообразно осеменять доноров в отдаленные сроки после окончания охоты, поскольку в дальнейшем это может оказывать вредное влияние на степень извлечения пригодных к пересадке зародышей.
Далее рассмотрим порядок извлечения зародышей. После оплодотворения яйцеклеток образующиеся зиготы подвергаются дроблению и попадают в матку на 4-й день. Зародыши целесообразно извлекать на 7 день после первого осеменения. Для извлечения зародышей используют два способа: нехирургический и хирургический.
Нехирургический способ. При этом способе животных помещают в фиксирующий станок. Хвост с помощью тесемки привязывают к ошейнику, затем проводят туалет и дезинфекцию наружных половых органов. Прямую кишку освобождают от содержимого. Ректальным исследованием определяют, сколько желтых тел находится в каждом яичнике. Сцелью прекращения перистальтики прямой кишки эпидурально вводят 5-19 мл 2%-ного раствора новокаина. Для вымывания зародыша из матки используют гибкий одноходовый катетер с упругим мандреном и надувным баллончиком. Инструмент должен быть стерильным. Катетер вводят во влагалище по его верхнему своду и проводят 250
под ректальным контролем через канал шейки матки в рог матки. Для более полного извлечения зародышей нужно, не травмируя слизистую оболочку, как можно глубже ввести инструмент в рог матки. По достижению катетером в роге матки необходимого положения, мандрен удаляют и в баллончик катетера накачивают 10-15 мл воздуха. При этом катетер фиксируется в роге матки и промывная жидкость не вытекает мимо катетера.
Закрепив катетер, промывают полость рога матки с помощью шприца емкостью 50 мл. Врог матки в зависимости от его величины вводят порциями 40-60 мл промывной жидкости, затрачивая на
2
1
4
2
3
Рис. 102. Катетер для извлечения эмбрионов: 1 -корпус катетера; 2 -мандрен; 3 -трубка для нагнетания воздуха; 4 -баллончик для воздуха.
3
6
4
1
5
2
Рис. 103. Вымывание эмбриона: 1 -катетер для извлечения эмбриона; 2 -шейка матки; 3 -рог матки; 4 -надувной баллончик; 5 -яичники; 6 -прямая кишка. 251
промывание каждого рога не более 500 мл. Наполнение матки промывной средой и степень ее оттока контролируют ректально.
Для более полного извлечения зародышей верхушку рога матки приподнимают и выпрямляют. Некоторые авторы рекомендуют яйцепровод вблизи верхушки рога матки осторожно зажать большим и указательным пальцами. При этом предотвращается поступление в брюшную полость жидкости, содержащей заро
7
6
9
5
8
3
3
4
4
2
1
10
Рис. 104. Катетер для вымывания эмбрионов: 1 -бутыль для сбора эмбрионов; 2 -бутыль для вымывной жидкости (Среды Дюльбекко); 3 -зажим; 4 -шприц на 50 мл; 5 -клапан Люер-Локка; 6 -металлическое тело катетера; 7 -баллончик для воздуха; 8 -пластиковая канюля с 2-мя боковыми отверстиями; 9 -пластиковый зонд; 10 -термостат.
прямая кишка
баллончик с воздухом
шейка матки
катетер
влагалище
яичник
воздух
рог
матки
среда
Дюльбекко
вымывная жидкость
с эмбрионами
гибкий зонд
Рис. 105 Вымывание эмбрионов.252
дыши. Однако практика показывает, что поступление в брюшную полость жидкости из рога матки отмечается только при наличии большого давления в матке, поэтому яйцепровод можно не зажимать. Перед извлечением катетера следует удалить воздух из баллончика. Затем промывают второй рог.
Вкачестве среды для промывания используют фосфатно-буферный солевой раствор (ФБС) Дюльбекко (см. табл.), в который входят:
Раствор готовят на тридистиллированной воде. Первые 4 вещества растворяют в 800 мл, а 5-е и 6-е -каждое отдельно в 100 мл. Витоге получают три раствора, которые автоклавируют, а затем смешивают. Втаком виде их можно хранить при 4°Сдо 2 нед. Непосредственно перед употреблением в ФБСвводят следующие компоненты (в расчете на 1 л):
Альбумин бычьей сыворотки -4 г;
Глюкоза -1 г (5,56 ммоль);
Na-пируват -0,036 г (0,33 ммоль);
Пенициллин (калиевая соль) -100 тыс. ЕД.
Собранную в цилиндр промывную жидкость отстаивают 20-35 мин при температуре 20-37°С, чтобы зародыши опустились на дно, после чего верхний слой удаляют с помощью сифона. Нижний слой жидкости порционно по 20-30 мл для обнаружения зародышей исследуют в больших часовых стеклах или чашках Петри под бинокулярной лупой при 10-50-кратном увеличении. Найденных зародышей с помощью пастеровской пипетки переносят в среду для кратковременного хранения (среда Дюльбекко с добавлением 20% фетальной сыворотки теленка). После оценки зародышей их культивируют при 37°Сдо момента пересадки или оставляют для хранения.
Хирургический способ извлечения зародышей. Проводят при общем или местном обезболивании. Разрезают брюшную стенку по белой линии или чаще в области голодной ямки справа или слева, подтягивают рог матки к поверхности раны, делают разрез вблизи его основания и вставляют катетер. Затем через иглу, введенную в полость рога у его верхушки или через канюлю, вставленную в яйцепровод, вводят специальную среду, которую вместе с зародышами собирают через катетер. При этом методе получают 253
до 70% жизнеспособных зародышей. Однако хирургический способ нельзя повторять часто, так как в послеоперационный период образуются спайки, из-за чего возникают трудности в извлечении зародышей, а затем могут развиваться необратимые изменения, приводящие к бесплодию доноров.
