И размораживание эмбрионов

После морфологической оценки зародышей до пересадки их можно кратковременно хранить в термостате при температуре 37°С. При этом их помещают на часовое стекло в 0,5 мл среды Дюльбекко с добавлением 20% фетальной сыворотки теленка или сыворотки овцы. Зародышей можно культивировать в пробирках, а также в ампулах и пайеттах из поливинилхлорида. До 4-7 дней сохранить их можно в перевязанном яйцепроводе кролика. Однако наиболее

а б в г

Рис. 110. Бластоциста ранняя: а -отличная (Бл I ++); б -хорошая (Бл I +);

в -удовлетворительная (Бл I +-); г -дегенерированная (Бл I --).

а б в г

Рис. 111. Бластоциста поздняя: а -отличная (Бл II ++); б -хорошая (Бл II +);

в -удовлетворительная (Бл II +-); г -дегенерированная (Бл II --).

Рис. 112. Зигота двухбластомерная -видно разрушение клеточного комплекса. 258

перспективным методом является глубокое замораживание зародышей в жидком азоте при температуре -196°С. Зародыши крупного рогатого скота лучше других переносят замораживание и размораживание: выживаемость -50 -70%.

Возросший интерес к замораживанию и длительному хранению эмбрионов вполне понятен и объясняется желанием транспортировки эмбрионов на расстояния, а также осуществлять пересадку в любое время. При внедрении в практику криоконсервирования отпадает необходимость синхронизации охоты у доноров и реципиентов, а также содержания больших стад реципиентов.

Если в 70е годы на подготовку и замораживание эмбрионов тратилось до 7 час, то сегодня это составляет 15 мин.

Главная цель криоконсевирования -это с помощью холода затормозить обмен веществ и развитие зародыша. Для предупреждения образования кристаллов льда в среде и внутри зародыша, используют криопротекторы -гидрофильные вещества, обезвоживающие клетки.

Криоконсервация отличных, хороших и сомнительных эмбрионов снижает их жизнеспособность после оттаивания в сравнении со свежеполученными в среднем на 10; 30 и 60 %. Таким образом, действие сверхнизких температур (-196°С) выдерживают преимущественно эмбрионы отличного и хорошего качества.

Для замораживания эмбрионов их последовательно переносят в растворы с нарастающей концентрацией криопротектора Внастоящее время в качестве вещества, обладающего свойством предохранять живые клетки от разрушения при низких температурах применяется 1 -1,5 М глицерин.

Проводку эмбрионов через возрастающие концентрации криопротекторов обычно осуществляют в 2 -5 мл среды при комнатной температуре, после чего их помещают в пайетты (соломины).

Существует 2а способа замораживания:

1) медленное охлаждение (около 1°С/ мин до -80°С) и перенос в жидкий азот;

2) медленное охлаждение до -30 -35°С, а затем быстрое охлаждение до температуре хранения (-196°С).

Специалисты чаще практикуют второй способ, так как он короче по времени исполнения.

Длительность хранения эмбрионов в жидком азоте зависит от потребностей производства и может продолжаться десятилетиями.

Оттаивание эмбрионов в соломинах рекомендуют производить в водяной бане при 35°Св течение 20 с. Эмбрионы переносят в растворы с понижающейся концентрацией криопротектора. Размо 259

роженные эмбрионы извлекают из пайетт, переносят в приготовленные растворы глицерина и выдерживают 10 мин в каждой чашке. После этого повторно оценивают жизнеспособность зародышей, заправляют в соломинки и пересаживают обычным способом.