Алгоритм лабораторної роботи

 Кількісне визначення піровиноградної кислоти в сечі.

 Принцип методу: піровиноградна кислота (ПВК) при взаємодії з 2,4-дінітрофеніл-гідразином (2,4-ДФГ) в лужному середовищі утворює забарвлений комплекс жовто-оранжового кольору. Інтенсивність забарвлення прямо пропорційна кількості ПВК.

 Хід роботи.

 (Використовувати сухий посуд). В першу пробірку наливають 0,5 мл сечі; в другу – 0,5 мл стандарту. Потім в обидві пробірки додають по 1 мл розчину 2,4-ДФГ; і через 5 хвилин – по 4 мл концентрованого розчину KOH.

 Перемішують і через 5 хвилин визначають оптичну густину (екстинкцію) розчинів на ФЕК, в кюветах на 5 мм з синім світлофільтром. За величинами екстинкцій стандарту та досліду розраховують вміст ПВК в добовому об’ємі сечі.

 В нормі за добу з сечею виділяється:

 10 – 25 мг (114 – 284 мкмоль) ПВК.

 Підвищення екскреції відмічають при нестачі вітаміну B₁ та гіпоксіях різного походження.

Тема 11. Альтернативні шляхи обміну моносахаридів.
Метаболізм фруктози та галактози.

Актуальність теми.         

До альтернативних шляхів обміну моносахаридів відносять пентозофосфатний та глюкуронатний шляхи обміну глюкози, обмін фруктози та галактози.

Пентозофосфатний шлях обміну глюкози – джерело пентоз для синтезу нуклеотидів, нуклеїнових кислот, коферментів, крім цього є джерелом відновленої НАДФН, яка використовується при синтезі жирних кислот, холестеролу, стероїдних гопмонів та інших сполук.

Глюкуронатний шлях обміну глюкози – джерело глюкуронової кислоти, яка використовується для синтезу глікозаміноглікнів (вуглеводних похідних протеогліканів – білків сполучної тканини) та бере участь у знешкодженні токсинів в печінці.

Фруктоза та галактоза включаються в шлях обміну глюкози. При порушенні перетворення фруктози та галактози розвивається фруктоземія та галактоземія.

 

Мета та вихідний рівень знань.

Загальна мета: вивчити альтернативні шляхи обміну моносахаридів.

Конкpетні цілі: трактувати біохімічні закономірності шляхів обміну моносахаридів, пентозофосфатний шлях окислення глюкози, шлях уронових кислот. 

Вихiдний piвень знань-вмiнь: вміти писати будову моносахаридів, гексуронових кислот.

Оpiєнтувальна каpтка для самостiйного вивчення студентами

Учбової лiтеpатуpи пpи пiдготовцi до заняття.

Змiст i послiдовнiсть дiй	Вказiвки до навчальних дiй
1. Практичне вивчення методу визначення пентоз в крові.	1.1. Кількісне визначення пентоз в сироватці в крові.
2. Пентозофосфатний шлях (ПФШ) обміну глюкози.	2.1. Біологічне значення та особливості функціонування пентозофосфатного шляху в різних тканинах. 2.2. Послідовність ферментативних реакцій ПФШ: а) окислювальна стадія; б) стадія ізомерних перетворень. 2.3. Порушення пентозофосфатного шляху обміну глюкози в еритроцитах: ензимопатія глюкозо-6-фосфат-дегідрогенази.
3. Метаболізм фруктози.	3.1. Метаболічний шлях та ферментативні реакції перетворення фруктози в організмі людини. 3.2. Спадкові ензимопатії, пов’язані з генетичними дефектами синтезу ферментів метаболізму фруктози – непереносимість фруктози (фруктоземія).
4. Метаболізм галактози.	4.1. Метаболічний шлях та ферментативні реакції перетворення галактози в організмі людини. 4.2. Спадкові ензимопатії, пов’язані з генетичними дефектами синтезу ферментів метаболізму галактози – галактоземія.

 

Індивідуальна самостійна робота студентів.

1. Побудувати схеми метаболічних шляхів обміну вуглеводів.

2. Оцінювати стан вуглеводного обміну за біохімічними показниками при патологічних процесах.

3. Клінічне значення галактозної проби.

 

Алгоритм лабораторної роботи.

Кількісне визначення пентоз в крові.

Принцип методу: метод базується на кольоровій реакції між пентозою (рибозою або дезоксирибозою) та орцином в кислому середовищі в присутності Fe³⁺. При їх взаємодії утворюється комплекс зеленого кольору. Густина забарвлення залежить від кількості пентоз.

Хiд pоботи:

В пpобipку до 0,5 мл досліджуваного розчину до­­­дати 0,5 мл 1% оpцину (приготовленого на 0,1% розчині FeCl₃ в концентрованій HCl). Одночасно поставити стандарт: взяти 0,5 мл розчину пентози відомої концентрації і додати 0,5 мл орцинового реактиву.

Пробірки помістити в киплячу водяну баню на 40 хвилин. Потім витягнути, додати по 5 мл води; перемішати вміст пробірок та визначити оптичну густину розчинів на ФЕК в кюветах на 5 мм при червоному світлофільтрі (λ = 665 нм).

За найденими величинами оптичної густини стандарту та досліджуваного розчину скласти пропорцію і розрахувати вміст пентози.

В нормі концентрація пентоз: в крові – менше 133 мкмоль/л (2мг%), в сечі – в середньому близько 250 мг/доб.

 

Тема 12. Дослідження катаболізму та біосинтезу глікогену.
Регуляція обміну глікогену.

Актуальність теми.

Знання лiкаpем бiохiмiчних механiзмiв синтезу та розпаду глікогену, як процесів регулюючих концентpацiю глюкози в кpовi, має важливе значення для оцiнки стану вуглеводного обмiну, pозумiння патогенезу окpемих спадкових і неспадкових захвоpювань та їх дiагностики.

Головним джерелом глюкози як метаболічного палива для організму є її надходження з харчовими продуктами. Втім, існують метаболічні шляхи, що забезпечують організм глюкозою за рахунок її синтезу з невуглеводних біомолекул (пірувату, лактату, глікогенних амінокислот, гліцеролу).

Біосинтез глюкози забезпечує її нормальну концентрацію в умовах зниженого надходження моносахаридів та вичерпання головного акумульованого джерела глюкози – глікогену печінки. Глюконеогенез відіграє головну адаптаційну роль при стрес-синдромі.