2020-10-10
109
Наиболее распространенный метод – метод G. Manchini – реакция радиальной иммунодиффузии в геле. В основе реакции лежит взаимодействие антигена и антитела с образованием преципитата, который осаждается в геле в виде визуально определяемых колец преципитации (рис. 23). В качестве антитела выступает антисыворотка (сыворотка, содержащая антитела против соответствующего класса Ig), а в роли антигена – сыворотка, содержащая исследуемый класс Ig. При постановке реакции смешивают антисыворотку с жидким (расплавленным) агаром, затем агар наливают на горизонтально установленную стеклянную пластинку, после «застывания» агара на ней пробойником продавливают лунки. В пять лунок микропипеткой вносят контрольные образцы по 2 мклстандартной сыворотки с известной концентрацией иммуноглобулинов в разведениях 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, а в остальные лунки – по 2 мкл исследуемой сыворотки. Пластины помещают во влажную камеру и инкубируют при комнатной температуре в течение 18-24 ч при определении IgA и IgG, 48 ч- при определении IgM. В процессе инкубации сывороточные Ig диффундируют в агар, соединяются с антителами, образуя кольца преципитации. Для определения Ig каждого класса используется отдельная стеклянная пластинка.
Замер диаметров колец преципитации производят на влажных слоях агарового геля. Определив диаметр (D) колец преципитации в стандартной сыворотке с известным уровнем Ig, строят кривую на полулогарифмической бумаге, где на оси ординат откладывают концентрацию Ig, а на оси абсцисс – диаметр колец
| Рис. 23. Результаты реакции радиальной иммунодиффузии в теле (в агаре) |
| D, мм |
Рис. 24. Кривая зависимости концентрации Ig
от диаметра кольца преципитации
Далее, измерив диаметр колец исследуемых сывороток, определяют по стандартной кривой концентрацию Ig.
