Процесс фагоцитоза состоит из ряда последовательных взаимосвязанных стадий: движения, адгезии, поглощения, образования повреждающих факторов – активных форм кислорода и азота, а также – киллинга и расщепления объекта фагоцитоза. В клинической практике обычно ограничиваются исследованием способности фагоцитов к поглощению и образованию активных форм кислорода.
Для изучения процесса поглощения фагоцитами используют бактериальные клетки, дрожжеподобные грибы и частицы латекса. Взвесь лейкоцитов инкубируют с одним из приведенных объектов, в большинстве лабораторий – со стандартными частицами латекса (1,35 мкм в диаметре). Делают мазок, окрашивают его и считают число нейтрофилов, захвативших частицы латекса (рис. 28). Процент фагоцитирующих нейтрофилов обозначается как фагоцитарный индекс. Второй показатель фагоцитарной активности нейтрофилов – фагоцитарное число, показывающее, сколько частиц в среднем поглощает один фагоцитирующий нейтрофил.
Для оценки респираторного взрыва при фагоцитозе имеется большой набор цитохимических и биохимических тестов. Наи более простым и в то же время надежным является НСТ-тест. Сущ-ность метода заключается в том, что в процессе фагоцитоза образуются супероксидные радикалы, которые восстанавливают используемый в качестве объекта фагоцитоза нитро-
Рис. 28. Сегменто-ядерный нейтрофил, поглотивший частицы латекса |
|
|
Темно-синие глыбки формазана можно увидеть под обычным микроскопом и сосчитать процент нейтрофилов, имеющих эти глыбки. С целью объективизации оценки результатов анализа предложен спектрофотометрический вариант НСТ-теста, заключающийся в растворении зерен формазана с помощью органических растворителей и учета интенсивности окраски при 670 нм.
Результаты лабораторного исследования иммунной системы оформляют в виде таблицы, называемой иммунограммой. Иммунограмма характеризует иммунный статус – совокупность количественных и функциональных показателей, отражающих состояние иммунной системы человека в конкретный момент времени. Известно, что иммунная система связана прежде всего с нервной и эндокринной системами и функционирует по законам целостного организма. Существуют возрастные различия показателей иммунного статуса. У детей раннего возраста уровни Ig ниже таковых у взрослых. IgM достигает уровня взрослых к году жизни ребенка, IgG – к семи годам, IgA – лишь к 12 годам. Число лимфоцитов имеет максимальные значения у грудного ребенка, а затем начинает уменьшаться и к семи годам жизни ребенка выравнивается с показателем взрослого человека. Такие показатели, как число лейкоцитов, лимфоцитов и их популяций, с возрастом постепенно уменьшаются, но при этом возрастает содержание нейтрофилов и IgG. Изучение сезонных колебаний функциональной активности иммунной системы показало, что максимальное значение показателей Т- и В-звеньев иммунного ответа наблюдается в зимнее время. Количество и функциональная активность Т-лимфоцитов уменьшается весной и сохраняется на сниженных уровнях летом. Снижение количественно-функциональных свойств В-клеток происходит летом. Для каждого региона разработаны свои нормальные значения показателей иммунного статуса населения. В качестве примера референсных иммунологических параметров приводим значения показателей иммунограмм практически здоровых жителей Чувашии (табл. 11).
|
|
Таблица 11
Показатели иммунного статуса здоровых жителей Чувашии
(по Карзаковой Л.М., 2005)
Показатель | Предел колебаний | |
Лейкоциты | 109/л | 4,7-6,4 |
Нейтрофилы | % | 55,5-62,0 |
109/л | 2,59-3,82 | |
Лимфоциты | % | 33,5-40,5 |
109/л | 1,6-2,34 | |
Т-лимфоциты (CD3+) | % | 58,0-65,5 |
109/л | 0,94-1,48 | |
Т-хелперы (CD4+) | % | 34,0-40,5 |
109/л | 0,56-0,91 | |
Цитотоксические Т-лимфоциты (CD8+) | % | 22,0-26,0 |
109/л | 0,38-0,55 | |
CD4+/CD8+ | 1,4-1,63 | |
Лимфоциты, несущие рецептор к IL-2 (CD25+) | % | 5,2-8,0 |
109/л | 0,09-0,17 | |
109/л | 0,30-0,41 | |
Клетки, несущие Fas-рецептор апоптоза (CD95+) | % | 17-21 |
109/л | 0,30-0,46 | |
В-лимфоциты (CD20+) | % | 10-17 |
109/л | 0,19-0,34 | |
IgM | г/л | 1,05-1,35 |
IgG | г/л | 10,6-12,5 |
IgA | г/л | 1,57-2,1 |
ЦИК | у. е. | 12-20 |
NK-клетки (CD16+) | % | 12-17 |
109/л | 0,22-0,43 | |
Фагоцитарный индекс | % | 59-67 |
Фагоцитарное число | 3,7-4,8 | |
НСТ-тест | % | 10-14,5 |
Примечание: предел колебаний включает значения интервала Р25 – Р75 (нижний квартиль – верхний квартиль)