Оценка фагоцитарной активности

Процесс фагоцитоза состоит из ряда последовательных взаимосвязанных стадий: движения, адгезии, поглощения, образования повреждающих факторов – активных форм кислорода и азота, а также – киллинга и расщепления объекта фагоцитоза. В клинической практике обычно ограничиваются исследованием способности фагоцитов к поглощению и образованию активных форм кислорода.

Для изучения процесса поглощения фагоцитами используют бактериальные клетки, дрожжеподобные грибы и частицы латекса. Взвесь лейкоцитов инкубируют с одним из приведенных объектов, в большинстве лабораторий – со стандартными частицами латекса (1,35 мкм в диаметре). Делают мазок, окрашивают его и считают число нейтрофилов, захвативших частицы латекса (рис. 28). Процент фагоцитирующих нейтрофилов обозначается как фагоцитарный индекс. Второй показатель фагоцитарной активности нейтрофилов – фагоцитарное число, показывающее, сколько частиц в среднем поглощает один фагоцитирующий нейтрофил.

Для оценки респираторного взрыва при фагоцитозе имеется большой набор цитохимических и биохимических тестов. Наи более простым и в то же время надежным является НСТ-тест. Сущ-ность метода заключается в том, что в процессе фагоцитоза образуются супероксидные радикалы, которые восстанавливают используемый в качестве объекта фагоцитоза нитро-

Рис. 28. Сегменто-ядерный нейтрофил, поглотивший частицы латекса

синий тетразолий с образованием нерастворимых окрашенных зерен формазана.

Темно-синие глыбки формазана можно увидеть под обычным микроскопом и сосчитать процент нейтрофилов, имеющих эти глыбки. С целью объективизации оценки результатов анализа предложен спектрофотометрический вариант НСТ-теста, заключающийся в растворении зерен формазана с помощью органических растворителей и учета интенсивности окраски при 670 нм.

Результаты лабораторного исследования иммунной системы оформляют в виде таблицы, называемой иммунограммой. Иммунограмма характеризует иммунный статус – совокупность количественных и функциональных показателей, отражающих состояние иммунной системы человека в конкретный момент времени. Известно, что иммунная система связана прежде всего с нервной и эндокринной системами и функционирует по законам целостного организма. Существуют возрастные различия показателей иммунного статуса. У детей раннего возраста уровни Ig ниже таковых у взрослых. IgM достигает уровня взрослых к году жизни ребенка, IgG – к семи годам, IgA – лишь к 12 годам. Число лимфоцитов имеет максимальные значения у грудного ребенка, а затем начинает уменьшаться и к семи годам жизни ребенка выравнивается с показателем взрослого человека. Такие показатели, как число лейкоцитов, лимфоцитов и их популяций, с возрастом постепенно уменьшаются, но при этом возрастает содержание нейтрофилов и IgG. Изучение сезонных колебаний функциональной активности иммунной системы показало, что максимальное значение показателей Т- и В-звеньев иммунного ответа наблюдается в зимнее время. Количество и функциональная активность Т-лимфоцитов уменьшается весной и сохраняется на сниженных уровнях летом. Снижение количественно-функциональных свойств В-клеток происходит летом. Для каждого региона разработаны свои нормальные значения показателей иммунного статуса населения. В качестве примера референсных иммунологических параметров приводим значения показателей иммунограмм практически здоровых жителей Чувашии (табл. 11).

Таблица 11

Показатели иммунного статуса здоровых жителей Чувашии

(по Карзаковой Л.М., 2005)

 

Показатель		Предел колебаний
Лейкоциты	109/л	4,7-6,4
Нейтрофилы	%	55,5-62,0
	109/л	2,59-3,82
Лимфоциты	%	33,5-40,5
	109/л	1,6-2,34
Т-лимфоциты (CD3+)	%	58,0-65,5
	109/л	0,94-1,48
Т-хелперы (CD4+)	%	34,0-40,5
	109/л	0,56-0,91
Цитотоксические Т-лимфоциты (CD8+)	%	22,0-26,0
	109/л	0,38-0,55
CD4+/CD8+		1,4-1,63
Лимфоциты, несущие рецептор к IL-2 (CD25+)	%	5,2-8,0
	109/л	0,09-0,17
	109/л	0,30-0,41
Клетки, несущие Fas-рецептор апоптоза (CD95+)	%	17-21
	109/л	0,30-0,46
В-лимфоциты (CD20+)	%	10-17
	109/л	0,19-0,34
IgM	г/л	1,05-1,35
IgG	г/л	10,6-12,5
IgA	г/л	1,57-2,1
ЦИК	у. е.	12-20
NK-клетки (CD16+)	%	12-17
	109/л	0,22-0,43
Фагоцитарный индекс	%	59-67
Фагоцитарное число		3,7-4,8
НСТ-тест	%	10-14,5

Примечание: предел колебаний включает значения интервала Р₂₅ – Р₇₅ (нижний квартиль – верхний квартиль)