ІІ. Работа на занятии

План занятия:

1. Вводное слово преподавателя о порядке проведения занятия – 10 мин.

2. Разбор теоретического материала с контролем знаний студентов – 50 мин.

3. Знакомство с методикой выполнения практической работы – 10 мин.

4. Самостоятельная работа студентов – 55 мин.

5. Обсуждение полученных результатов – 10 мин.

 

Практическая работа студентов

Работа 1. Изучение радиочувствительности клеток костного мозга.

1.1. Работа проводится на трех мышах,  две из которых  накануне занятия, были подвергнуты облучению в дозах 2 и 5 Гр. У здорового и опытных животных определяется общее количество ядросодержащих клеток костного мозга (миелокариоцитов)  в расчете на одно бедро и изучается морфология костного мозга на специально приготовленных мазках.

Для определения общего количества миелокариоцитов у мышей выделенную и тщательно очищенную от прилежащих тканей бедренную кость промывают в пробирке 1 мл 3-5 % раствора уксусной кислоты с помощью толстой иглы, насаженной на шприц емкостью 1 мл. Образовавшуюся смесь костного мозга ресуспендируют обратными всасываниями клеточной взвеси в шприц. Полученную таким образом взвесь клеток набирают в меланжер (смеситель) для лейкоцитов до метки «0,5», затем раствором уксусной кислоты до метки «11» (в конечном итоге костный мозг разводится в 20000 раз). Подсчет ядросодержащих клеток костного мозга ведется в 100 больших квадратах счетной камеры Горяева (так же, как подсчет лейкоцитов периферической крови). Число сосчитанных клеток умножают на 50000 и вычисляют ОКМ (общее количество миелокариоцитов в метафизе бедренной кости).

Полученные данные используют для построения графика зависимости содержания ОКМ от дозы ионизирующего излучения (величину дозы излучения откладывают на шкале абсцисс, а количество миелокариоцитов – на оси ординат).

1.2. Мазки костного мозга делают на чистых обезжиренных предметных стеклах при помощи шлифовального стекла. Для приготовления мазков костного мозга полученную из сегментов грудины миелоидную ткань на предметном стекле смешивают с каплей сыворотки крови. В правильно приготовленных мазках клетки расположены отдельно друг от друга и их структура хорошо видна. Мазки костного мозга фиксируют в течение 5мин в метиловом алкоголе и окрашивают азурII-эозином. Дифференциальный подсчет клеток костного мозга осуществляют под микроскопом (объектив х 90, окуляр х 10, иммерсионное масло). Подсчитывают подряд не менее 200 клеточных элементов, вычисляя затем процент каждого вида клеток.

По данным, полученным при подсчете клеток на мазках костного мозга интактных мышей и животных с ОЛБ (дозы 2 и 5 Гр), делается вывод о радиочувствительности клеточных элементов отдельных ростков костного мозга.

 

Вопросы для обсуждения:

1. Какие формы клеточной гибели и  возможные механизмы летальных эффектов облучения Вы можете назвать?

2. Как зависят от дозы излучения показатели общего количества миелокариоцитов?

3. Как изменяется содержание клеточных элементов отдельных ростков кроветворения после облучения?

4. Каковы особенности  радиочувствительности эритроидного, миелоидного и лимфоидного ростков гемопоэза?

5. Какие  основные морфологические признаки повреждения клеток костного мозга после их облучения можете назвать?

 

Литература

ОСНОВНАЯ:

1.  Бутомо Н.В., Гребенюк А.Н., Легеза В.И., Малаховский В.Н., Ушаков И.Б. Основы медицинской радиобиологии / Под ред. И.Б. Ушакова. – СПб: ООО Издательство Фолиант, 2004.

2. Кудряшов Ю.Б. Радиационная биофизика (ионизирующее излучение) / Под ред. В.К. Мазурика, М.Ф. Ломанова. – М.: ФИЗМАТЛИТ, 2004.

3. Цыб А.Ф., Будагов Р.С., Замулаева И.А. и др. Радиация и патология. Учебное пособие / Под ред. А.Ф. Цыба. – М.: Высшая школа, 2005.

4. Ярмоненко С.П., Вайнсон А.А. Радиобиология человека и животных. Учебное пособие / Под ред. С.П. Ярмоненко. – М.: Высшая школа, 2004.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ:

5. Уразова О.И., Новицкий В.В. Лабораторная диагностика гематологических синдромов и болезней. Учебное пособие. – Томск: Изд-во Печатная мануфактура, 2008.

6. Пак В.В., Лысенко Н.П., Рогожина Л.В. и др. Практикум по радиобиологии М., «Колосс» 2007.

 

 

Занятие 7

Тема: радиочувствительность тканей, органов, организма. РАДИАЦИОННЫЕ СИНДРОМЫ

Цель:

1. Рассмотреть понятие «радиочувствительность» и механизмы, определяющие радиочувствительность биологических объектов.

2. Изучить в эксперименте зависимость лучевого поражения от вида животного.