Совую основу
II. лаборантские
II. лаборантские
I. врачебные
Светооптический метод (традиционная качественная гистология)
По задачам
По объекту исследования
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Методы исследования можно разделить на две большие группы:
По объекту исследования:
I. Методы исследования живых клеток и тканей
1. непосредственно в организме (in vivo)
2. в культуре клеток и ткани – в пробирке (in vitro)
3. суправитальное исследование
- суправитальное - исследование живых клеток, выделенных из организма
II. Методы исследования фиксированных клеток и тканей
1. светооптическая микроскопия
2. гистохимическое исследование - выявление в срезах
веществ разной химической природы (ДНК, РНК, гликоген,
импрегнация серебром, эластические волокна и т.д.)
3. иммуногистохимическое исследование – с применением
антител к исследуемым антигенам
4. электронно-микроскопические исследования - исследова-
ние клеточных ультраструктур
По задачам:
I. Качественные методы - выявление структур
Методы:
1. светооптический
2. электронно-микроскопический
3 гистохимический
4 иммуногистохимический
II. Количественные методы – изучение размеров или числа структур
Методы:
1. Морфометрический (количественная электронная микроскопия, количественная гистохимия)
2. иммунофенотипирование
3. цитогенетический
4. авторадиографический
5. ДНК-цитометрия
Две части:
1. приготовление гистологических препаратов
2. микроскопия гистологических препаратов
Этапы приготовления гистологических препаратов:
Врачебный этап:
1. забор материала -
- максимально должен отражать изучаемый объект
(столько кусочков, сколько необходимо)
- как можно более свежий
- кусочек не более 1 куб. см
- щадящее - острый инструмент, не сдавливать
2. маркировка
- простым карандашом ФИО, № истории болезни
3. фиксация
- цель – предотвратить разложение ткани
- закрепить прижизненные структуры
- формалин - 10%, нейтральный
- объем фиксатора должен быть в 20-100 раз
больше фиксируемого кусочка
- время фиксации – не менее 12 часо до
нескольких суток (для иммуногистохими
- не более 24 часов)
4. проводка материала
а. промывка - отмывают от формалина
- в проточной воде до 1 часа
б. обезвоживание
- обеспечивает проникновение парафина
- проводка по спиртам восходящей крепости до абсолютного спирта (от 60 до 100 градусов)
в. уплотнение - парафиновая заливка материала - заливка в расплавленный до 56 гр парафин
г. формирование блока
- когда парафин застыл, вырезают кусочек ткани
- насаживают на деревянную или пластмас-
- на микротомах
1. санные
2. роторные (серийные срезы)
3. замораживающие (срочные исследования)