2014-02-04
1691
По задачам
По объекту исследования
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Цитогенетический метод
Иммуногистохимия
- метод качественного определения антигенов в клетках и тканях на гистологических срезах
Задачи метода:
1. определение гистогенетического типа исследуемой ткани
2. определение иммунофенотипа клеток
3. оценка процессов пролиферации (Ki-67, PCNA) и апоптоза (СD 95) в ткани
4. определение наличия рецепторов к гормонам
5. определение ростовых факторов (IL 1-16)
6. выявление онкопротеинов (р21, р53, N-MYC и т.д.)
7. определение типов коллагена (I, II, IY типа)
8. микробиология/вирусология (гепатиты В и С, цитомегаловирус, герпес и т.д.)
Окраска:
Моноклональные антитела
Определение гистогенетического типа клеток тканей:
- основано на выявлении белков промежуточных филаментов, специфичных для клеток определенных тканей
1. эпителиальные ткани - выявляется кератин (Кeratin)
2. соединительные ткани - виментин (Vimentin)
3. нервная ткань - S100 protein
|
|
|
4. мышечные ткани - десмин (Desmin)
5. лимфоидная и миелоидная ткани - общий лейкоцитарный антиген (LCA)
- метод качественного и количественного анализа хромосом человека
Актуальность:
1. шесть из 1000 детей рождаются с различными хромосомными нарушениями
2. увеличение возраста матерей - критический возраст матери, после которого вероятность рождения больного ребенка резко возрастает – 35 лет
3. диагностика опухолевых заболеваний, учет при выборе тактики лечения и определение прогноза заболевания
Принцип метода:
- т.к. анализ осуществляется на хромосомах, а последние возможно наблюдать во время митоза то:
1. исследуемые клетки обрабатывают веществом,
стимулирующим митотическую активность -
фитогемагглютинином (ФГА) в условиях in vitro
2 накопление числа метафазных пластинок – в результате разрушения веретена деления - колхицин
3 отбор метафазной пластинки, где хромосомы не
наслаиваются, не наползают друг на друга
4. раскладка хромосом
5. анализ
Методы исследования можно разделить на две большие группы:
По объекту исследования:
I. Методы исследования живых клеток и тканей
1. непосредственно в организме (in vivo)
2. в культуре клеток и ткани – в пробирке (in vitro)
3. суправитальное исследование
- суправитальное - исследование живых клеток, выделенных из организма
II. Методы исследования фиксированных клеток и тканей
1. светооптическая микроскопия
2. гистохимическое исследование - выявление в срезах
веществ разной химической природы (ДНК, РНК, гликоген,
импрегнация серебром, эластические волокна и т.д.)
3. иммуногистохимическое исследование – с применением
|
|
|
антител к исследуемым антигенам
4. электронно-микроскопические исследования - исследова-
ние клеточных ультраструктур
По задачам:
I. Качественные методы - выявление структур
Методы:
1. светооптический
2. электронно-микроскопический
3 гистохимический
4 иммуногистохимический
II. Количественные методы – изучение размеров или числа структур
Методы:
1. Морфометрический (количественная электронная микроскопия, количественная гистохимия)
2. иммунофенотипирование
3. цитогенетический
4. авторадиографический
5. ДНК-цитометрия
Две части:
1. приготовление гистологических препаратов
2. микроскопия гистологических препаратов
Этапы приготовления гистологических препаратов:
