Гидролиз пептидной связи действием карбоксипептидазы и получение аминокислоты со свободной СООН группой

Действуют аминопептидазой и получают N-концевую аминокислоту;

2. Примененяют метод Эдмана:

Для этого белок в щелочной среде обрабатывают, например, фенилизотиоцианатом, который с NH₂ образует негидролизуемую (прочную) связь.

Далее кислотой гидролизуют пептидную связь и получают фенилтиогидантоиновое (ФТГ) производное валина:

ФТГ - валин с помощью растворителей извлекают и идентифицируют хроматографией:

Далее аналогично получают фенилтиогидантоиновое фенилаланина:

ФТГ-производные N-концевых остатков идентифицируют хроматографией. Производные поглощают свет при 265-270 нм, что используется в автоматических анализаторах - секвенаторах ( от анг. sequence – последовательность).

Определение С- концевой аминокислоты включает:

Разрушение пептидных связей под действием ферментов - протеаз, протекает специфично (избирательно):

- химотрипсин катализирует гидролиз пептидных связей, образованных карбоксильными группами ароматических α-аминокислот (Туr, Phe, Trp),

- трипсин гидролизует связи, образованные карбоксильными группами основных α-аминокислот (Lys, Arg);

- термолизин расщепляет пептидные связи, включающие аминокислотные остатки с гидрофобной боковой цепью (Ile, Leu, Val, Phe, Tyr, Trp).