Методы для определения молекулярных масс белков

Форма молекул взаимосвязана с функциональной ролью в клетке.

Форма и размер белковых молекул

Физико-химические свойства белков

Белок диссоциирует на субъединицы под действием реагентов, разрывающих слабые связи (мочевина, детергенты, солевые растворы).

РЕЗЮМЕ

Белки состоят из аминокислотных остатков, связанных между собой пептидными связями, образующих полипептидные цепочки, которые благодаря водородным, ионным, дисульфидным связям и гидрофобным взаимодействиям определенным образом располагаются в пространстве, т.е. имеют определенную конформацию. При нормальных физиологических условиях белок имеет нативную конформацию.

3 типа белков:

- Фибриллярные, образующие длинные волокна без значительного числа изгибов и петель. Содержатся в костях, сухожилиях, шелк (кератин волос, рогов, фиброин шёлка). Они не растворимы в воде и разбавленных солевых растворах.

- Глобулярные, имеющие компактную форму запутанного клубка, которая благоприятна для взаимодействия с другими молекулами (ферменты, гормоны);

Форму белковой молекулы выражают отношением длины большой оси к малой: в/а. Глобулярные белки могут различаться по форме: сигара, эллипсоид вращения, иглы и т. д. Растворимые в воде.

- Промежуточный тип: растворимые в водных, солевых растворах, но состоящие из длинных фибриллярных структур (Миозин – белок мышц, фибриноген крови).

2.2 Молекулярные массы белков колеблются от ~ 6000 до 1 000 000 Да и выше. 1 дальтон = 1,661 * 10^{-24 грамм.}

2.2.1 Осмотическое давление. Если вещество, растворенное в воде, отделено от чистой воды мембраной, проницаемой для воды и непроницаемой для вещества, то вода будет поступать внутрь объема, где находится раствор. Уровень воды в мембранном пространстве поднимется. Это избыточное давление равно осмотическому давлению (π).

π = R* C *T,

где π -осмотическое давление в атмосферах;

R – универсальная газовая постоянная;

С – молярная концентрация растворенного вещества;

Т – абсолютная температура

,

где c – концентрация в граммах на литр; М – молекулярный вес.

π = М = (R c T) / π

2.2.2 Метод седиментацоннго анализа. разработан в 1925г. Сведбергом, основан на применении ультрацентрифугирования. В ультрацентрифуге в сотни тысяч раз увеличивается сила тяжести и молекулы белка оседают в растворе. По скорости их оседания (седиментации) вычисляют молекулярную массу белка.

2.2.3. Диффузионный метод – определение скорости диффузии, которая обратно пропорциональна величине молекулярного вещества.

2.2. 4. По светорассеиванию