Таблица 12 - Дифференциация энтерококков
От лошадей
Таблица 11 - Дифференциация стрептококков, выделяемых
Выделяемых от свиней
Выделяемых от крупного рогатого скота
Животных
Таблица 8 - Свойства стрептококков и энтерококков, выделяемых от
В таблицах 8, 9, 10 представлены критерии дифференциации основных видов патогенных стрептококков, вьщеляемых от лошадей, крупного рогатого скота, свиней.
Таблица 9 - Дифференциация основных видов стрептококков,
Вид стрептококка | Признаки | ||||||
Тип гемолиза | CAMP- тecт | Гидролиз | Образование кислоты из | Серологическая группа по Лансфилд | |||
эскулина | гиппурата | сорбита | маннита | ||||
S. agalactiae S. dysagalacdae | β α | + - | - - | + - | - - | - - | В С |
S. pneumoniae S. equi subsp. zooepidemicus | α β | - - | (+) - | - - | - + | - - | - С |
Таблица 10 - Дифференциация основных видов стрептококков,
Вид стрептококка | Признаки | |||||
Тип гемолиза | Образование кислоты из | Серологическая группа по Лансфилд | ||||
иннулина | маннита | сорбита | салицина | |||
S. porcinus | β (+) | - | + | + | + | Е, Р,U, V |
S. suis | β (a) | + | - | - | + | D, R, S |
S. pneumoniae | α | d | (-) | - | - | Нет |
S. equi subsp. zooepidemicus | β | - | - | + | + | С |
Вид стрептококка | Признаки | ||||
Тип гемолиза | Образование кислоты из | Серологическая группа по Лансфилд | |||
лактозы | сорбита | трегалозы | |||
S. equi subsp. equi | β | - | - | - | С |
S. equi subsp equisimillis | β | - | + | С | |
S. equi subsp. zooepidemicus | β | - | + | - | С |
Признак | Е.avium | E.casseliflavus | E. cecorum | E. dispur | E. durans | E. faecalis | E. faecium | E. gallinarum | E. hirae | |
Рост при 45° С | + | + | + | - | + | + | + | + | + | |
Рост в присутствии 6,5% NaCl | + | + | - | + | + | + | + | + | + | |
Тип гемолизина | α | н.д | α | н.д. | α. β | (β) | (α) | α, β | - | |
Образование H2S | + | - | н.д | + | - | н.д | н.д | - | н.д | |
Гидролиз гиппурата | d | - | - | d | d | (+) | + | + | - | |
Образование кислоты из | Рамнозы | + | (+) | - | н.д | - | d | - | - | - |
Сахарозы | + | + | + | + | - | + | d | + | + | |
Рафинозы | - | + | + | + | - | - | - | + | d | |
Сорбита | + | - | - | - | - | (+) | - | - | - | |
Маннита | + | + | - | - | (-) | + | (+) | + | - |
При идентификации S. pneumoniae, помимо критериев, изложенных в таблице 8, определяют чувствительность к лизису клеток стрептококка желчью (желчными кислотами) и чувствительность к оптохину.
|
|
Для проверки на желчеустойчивость 2-3 мл исследуемой культуры, выращенной на сывороточном бульоне, засевают в 5 мл 10%-ного желчного бульона. Среда становится мутной и ее помещают на час в термостат.
Клетки S. pneumoniae растворяются, среда становится прозрачной, зеленящие стрептококки, сходные по типу колоний и гемолиза, не растворяются в желчи. При получении нечетких результатов пробирки оставляют при комнатной температуре на 18-20 часов и затем производят окончательный учет. Можно просто положить крупинку сухой желчи на исследуемую колонию. Колонии S. pneumoniae растворяются и исчезают. При наличии натрия таурохолата смешивают равные объемы 10%-ного раствора соли и бульонной культуры, клетки пневмококков растворяются, и смесь становится прозрачной через 10-15 минут.
|
|
Чувствителыюсть S. pneumoniae к оптохину (этилгидрокупреин НС1) используют для дифферегщиации от других зеленящих стрептококков. Для этого применяют коммерческие бумажные диски с оптохипом. Испытуемую культуру засевают на кровяной агар, помещают на поверхность среды диски с оптохипом и культивируют 24 часа при 37° С. Как положительный результат расценивают задержку роста от 14 мм и более (при диске 6 мм), что характерно для S. pneumoniae. При отсутствии таких дисков может быть использован следующий метод: исследуемую культуру засевают на глюкозо-кровяной агар с оптохином (1:50 000), инкубируют при 37-38° С в течение 20-24 часов. S. pneumoniae на этой среде не растет.
Для видовой дифференциации энтерококков используют тесты, представленные в таблице 12, а также тест-систему ЕН-coccus test.
Серологическая идентификация стрептококков и энтерококков. В клеточной стенке многих стрептококков присутствует термостабильный полисахаридный антиген «С». В соответствии с его антигенными вариантами по системе Лансфилд стрептококки в РП подразделяют на серологические группы, которые обозначают заглавными буквами латинского алфавита.
Известно более 20 серологических групп стрептококков. Серологическая принадлежность патогенных для животных стрептококков представлена в таблице 6. Некоторые виды стрептококков (S. pneumoniae и др.) не содержат С-полисахарид и не могут быть классифицированы по системе Лансфилд. Иммунные серогрупповые стрептококковые сыворотки производит и высылает по заявкам ВГНКИ ветпрепаратов. За рубежом для этих целей имеются коммерческие препараты, позволяющие устанавливать серогруп-повую принадлежность в пределах серогрупп А, В, С, D, F и G в тесте латекс-агглютинации или серогрупп А, В, С, F и G в реакции коагглютинации на стекле, ИФА, а также выявлять антигены непосредственно в материале.
Определение серогрупповой принадлежности испьггуемой культуры стрептококка в реакции преципитации проводят следующим образом. Стрептококки выращивают в бульоне Хоттингера с 1% глюкозы при 37° С в течение 20 часов. В стеклянные центрифужные пробирки переносят
9 мл выращенной культуры, центрифугируют при 4000 об/мин. 25 минут. Над осадочную жидкость удаляют, к осадку добавляют 0,3-0,4 мм 0,2 N НС1, суспендируют и вьщерживают смесь в кипящей водяной бане
10 минут.
Затем пробирки охлаждают водой, добавляют в каждую пробирку каплю 0,04%-ного спиртового раствора фенолфталеина и затем по каплям добавляют 0,2 N раствор NaOH до приобретения раствором бледно-розовой окраски (кислота нейтрализована). Далее смесь вновь центрифугируют (4000 об/мин., 25 минут), над осадочную жидкость используют как растворимый антиген в РП.
Техника постановки реакции преципитации. Берут от пастеровских пипеток капилляры диаметром 0,5-1,0 мм, опускают капилляр концом в флакон с сывороткой и набирают в него сыворотку на длину капилляра 1-1,5 см. Удаляют избыток сыворотки с кончика капилляра, погружают его в пробирку с антигеном и набирают равное количество антигена. Капилляр переворачивают таким образом, чтобы смесь оказалась в середине капилляра, и закрепляют его вертикально в куске пластилина. Через 5 минут учитывают результат. Положительная реакция: образование хлопьев или резкое помутнение в середине столбика.
Биопроба. Используют для определепия патогенных свойств культур стрептококков, а также для их выделения из контаминированного материала.
|
|
Определение патогенности стрептококков проводят на трех белых мышах массой 14-16 г. Для заражения используют только свежевьщеленные 18-20-часовые культуры стрептококков, выращенные на глюкозо-сывороточном бульоне. Культуру в объеме 0,5 мл вводят внутрибрюшиино. Наблюдение ведут в течение 5 суток, при заражении патогенной культурой мьшш погибают в течение 1-2 суток. Из органов павших животных готовят мазки, окрашивают по Граму, на капсулы, микроскопируют. Параллельно производят посевы па глюкозо-кровяной агар и глюкозо-сывороточный бульон.
В соответствии с «Методическими указаниями по лабораторной диагностике стрептококкозов» при диагностике мыта (S. equisubsp. equi) рекомендуется исследуемым материалом (гной, истечение из носовой полости, суспензия из лимфатических узлов и органов) заражать подкожно в область спины двух белых мышей массой 12-15 граммов в дозе 0,1 мл (гной) или 0,5 мл (суспензия тканей). Для выяснения патогенных свойств выделенную бульонную культуру вводят аналогичным способом в объеме 0,1 мл. Наблюдение за животными ведут в течение 10 дней, гибель в положительных случаях наблюдают на 2-7 сутки. Органы и ткани от погибших животных подвергают микроскопическому исследованию и делают высевы на питательные среды. Как положительный результат оценивают гибель хотя бы одной мышки. Для ускоренного выделения
S. pneumoniae из контаминированного материала можно заражать двух белых мышей исходным материалом — 0,5 мл взвеси в бульоне. Далее через 6-8 часов из брюшной полости берут стерильным шприцом 1-2 капли жидкости и делают дробный высев на глюкозо-кровяной агар в чашках либо животное убивают в эти же сроки. Посев делают из крови сердца. Из селезенки готовят и микроскопируют мазки-отпечатки.
Идентификация стрептококков и энтерококков на базе планшетных фотометров фирмы «TERMO-Labsystems», «iEMS-Reader» и «Multican-Ascent»
Для идентификации каталазоотрицательных грамположительных кокков фирма «ПЛИВА-Лахема» выпускает две тест-системы: СТРЕПТОтест 16 - для идентификации стрептококков и ЭН-КОККУСтест - для идентификации энтерококков. Для дифференциации этих микроорганизмов используют ПИРАтест - положительный практически у всех клинически значимых энтерококков (из стрептококков этот тест положителен только у S. руоgепеs).
|
|