Питательные среды. Таблица 14 - Интерпретация реакций

Таблица 14 - Интерпретация реакций

Учет результатов и идентификация

Инокуляция и инкубация

После тщательного встряхивания подготовленную суспензию инокулируют по 0,1 мл во все лунки стрипа, помещенного в рамку пластинки. После инокуляции в лунку Н (тест аргинин) добавляют две капли парафинового масла. Рамку с инокулированными стрипами инкубируют в течение 24 часов при температуре 37 °С.

По окончании инкубации учитывают результаты всех тестов, используя при этом таблицу «Интерпретация реакций», цветную шкалу сравнения и/или цветные реакции контрольных штаммов.

Ко­лонка	Тест	Код	Результат (цветовая реакция)
			Положительный	Отрицательный
Н	Аргинин	АRG	Красно-фиолето­вая, красная	Желтая, светло-оранжевая
G	Сорбоза	SОЕ	Желтая, светло-оранжевая	Красная, оранже­во-красная
F	Арабиноза	АRА	Желтая, светло-оранжевая	Красная, оранже­во-красная
Ко­лонка	Тест	Код	Результат (цветовая реакция)
			Положительный	Отрицательный
Е	Маннитол	МАN	Желтая, светло-оранжевый	Красная, оранже­во-красная
D	Сорбитол	SOR	Желтая, светло-оранжевая	Красная, оранже­во-красная
С	Мелибиоза	МLВ	Желтая, светло-оранжевая	Красная, оранже­во-красная
В	Раффиноза	RАF	Желтая, светло-оранжевая	Красная, оранже­во-красная
А	Мелецитоза	МLZ	Желтая, светло-оранжевая	Красная, оранже­во-красная

Идентификацию проводят с помощью идентификационной таблицы или индекса, находящихся в инструкции к тест-системе. При окончательной идентификации учитывают всю дополнитель­ную информацию (источник выделения, характер колоний, наличие пигмента, подвижность и т. д.).

Глюкозо-сывороточный бульон. К свежему стерильному МПБ (рН 7,4-7,6) добавляют 10% стерильной инактивированной при 56° С в течение 30 минут сыворотки крови лошади.

Глюкозо-кровяной агар. К расплавленному МПА с температурой 42-45°С добавляют до 1 %-ный стерильный раствор глюкозы и 5-10% дефибринированной крови барана или кролика. Среду разливают в чашки Петри.

Желчный бульон. К МПБ добавляют необходимое количество нативной желчи крупного рогатого скота (10-40%), устанавливают необходимый рН (7,4-7,6), разливают по пробиркам и стерилизуют при 113-115° С в течение 20-30 минут.

Среда Эдварда. В 1000 мл дистилированной воды растворяют 10 г пептона, 10 г сухого мясного экстракта, 1 г эскулина, 5 г натрия хлорида, 0,0013 г кристалвиолета, 0,33 г талия сульфата, 15 г агар-агара; устанавливают рН 7,4; сте­рилизуют при 115°С 20 минут. К охлажденному до 45°С агару добавляют 5% стерильной крови барана, перемешивают и разливают среду в чашки Петри.

Энтерококковая дифференциально-диагностическая среда. К 1000 мл расплавленного МПА (45-50°С) добавляют 0,1 ТТХ (2,3,5-трифенилтетрозолий хлорид), 12,5 мл 0,01%-ного водного раствора кристалвиолета, 0,1 г налидиксовой кислоты, 20% обезжиренного молока, 1% глюкозы, 5% стерильной дефибринированной крови. Компоненты перемешивают и раз­ливают по чашкам Петри. ТТХ и палидиксовую кислоту предварительно растворяют в небольшом количестве МПБ.

Желтю-цитратная среда для энтерококков. К 100 мл МПА добавля­ют 20 мл дрожжевого автолизата, 100 мл желчи, 40 г цитрата натрия. Смесь кипятят на водяной бане, добавляют 0,1 г трифенилтетразалия хлористо­го и 200 ЕД/мл нолимиксина М. Колонии энтерококков на этой среде розово-красного цвета.

Желчно-кровяной агар Беленького для энтерококков. К 600 мл 3%-ного расплавленного МПА добавляют 400 мл нативной профильтрованной жел­чи. Стерилизуют при 115° С 30 минут. К охлажденному до 45° С агару добав­ляют 5% дефибринировашюй крови и разливают по чашкам Петри. На среде растут энтерококки, но не растут гноеродные и оральные стрептококки.

Молочная среда с полимиксином по Калине (для энтерококков). К 85 мл расплавленного МПА (45°С) добавляют 1,25 мл 0,01%-ного водного ра­створа кристалвиолета, 0,5 мл 10%-ного водного раствора 2, 3, 5-ТТХ, 15 мл стерильного обезжиренного молока, 20-40 ЕД/мл нолимиксина М. Среда, разлитая в чашки Петри, пригодна для использования в течение 7-10 дней при условии хранения в холодильнике (4° С). Колонии энтерокок­ков имеют красноватую окраску с зоной протеолиза.

Щелочно-полимиксиновая среда Калины (для энтеркокков). Готовят от­дельно три раствора. Раствор 1: 23 мл МПБ, 1 г глюкозы, 0,5 г натрия хлорида, 2 г дрожжевого экстракта. Раствор 2:25 мл дистиллированной воды, 0,53 г Na₂CO₃. Раствор3:25 мл дистиллированной воды, 0,25 г двух­основного фосфата калия.

Смеси стерилизуют раздельно при 112°С 12 минут, затем смешивают, устанавливают рН 10-10,2, добавляют воды до 100 мл, 1,6% спиртового раствора бромтимолового синего, 200 ЕД/мл полимиксина М.

Кровяной агар с азидом натрия. В 1000 мл дистиллирован­ной воды растворяют 10 г триптозы, 3 г сухого мясного экстракта, 5 г натрия хлорида, 0,2 г азида натрия, 12 г агара; устанавливают рН 7,2, автоклави-руют при 121° С 15 минут. К расплавленному агару (45°) добавляют 5% стерильной крови овцы, перемешивают и разливают в чашки Петри. Азид натрия подавляет рост многих грамотрицательных бактерий.

Селективная среда с антибиотиками для стрептококков. Врасплавленную и охлажденную агаровую среду добавляют 7% дефибринироваиной крови барана и антибиотики (на 1000 мл среды): налидиксовой кислоты - 7,5 мг, полимиксина В - 17 000 ЕД, неомицина сульфата - 2,12 мг. Каждый антибиотик предварительно растворя­ют в 20 мл стерильной дистиллированной воды. Готовую среду исполь­зуют в течение 48 часов при хранении в холодильнике. На среде ингибируется рост стафилококков, синегнойной палочки, энтеробактерий, предотвращается роение протея.

Если после засева материала на поверхность среды положить полоски фильтровальной бумажки (диски), пропитанные бацитрацином (10 ЕД), то можно дифференцировать стрептококки серогруппы А (чувствительные к бацитрацину) от

β-гемолитических стрептококков других групп, устойчи­вых к бацитрацину.

Агар с ацетатом таллия для энтерококков. Ацетат таллия - 1 г, пеп­тон - 10 г, дрожжевой экстракт - 10 г, глюкоза - 10 г, агар - 13 г, дис­тиллированная вода - 1000 мл, рН 6. Стерилизуют 15 минут при 118° С, охлаждают и добавляют 10 мл 1%-ного стерилизованного фильтрованием солянокислого трифенилтетразолия.