О-комплексных и монорецепторных О- и Н-агглютинирующих для идентификации сальмонелл в РА на стекле

Таблица 27 - Состав наборов сывороток сальмонеллезных

Таблица 26 - Антигенная структура групп сальмонелл, в которые

Таблица 25 - Дифференциация видов и подвидов бактерий рода

Таблица 24 - Биохимические свойства рода Salmonella

На основании биохимических характеристик возможна не только родо­вая идентификация сальмонелл, но и определение их видовой и подвидовой принадлежности.

Наибольшее значение для ветеринарии имеют сальмонеллы подвидов choleraesuis и arizonae, объединяющие более 80% всех сальмонелл.

Salmonella, первоначальные источники их выделения

Примечания: Данные по подвиду Indica приведены по Bergeys Manual of Determinative Bacteriology (1994). Обозначения: «-» — 0-10% штаммов положительные; «(-)» — 11-25% штаммов положительные; «+/-» — 26-75% штаммов положительные; «(+)» — 76-89% штаммов положительные; «+» — 90-100% штаммов положительные.

Учитывая возможность отклонений отдельных из перечисленных при­знаков, следует отметить, что биохимическая идентификация сальмонелл является лишь первым этапом работы в этом направлении. Окончательную идентификацию выделенных штаммов осуществляют с учетом последую­щего изучения их антигенной структуры.

Серологическая идентификация сальмонелл. Сальмонеллы имеют сложное антигенное строение. Основными антигена­ми, имеющими значение для идентификации сальмонелл на уровне рода, опре деления их видовой, серогрупповой и серовариантной принадлежности, явля­ются соматический или О-антиген и жгутиковый или Н-антиген.

О-антиген расположен на поверхности бактериальной клетки ипред­ставляет собой термостабильный (не разрушается при кипячении в течение 2 часов) фосфолипидо-полисахаридный комплекс. Он не однороден исо­держит различные антигенные факторы (дидезоксигексозы, или иначе по-лиозиды) на концах полисахаридных цепей, что обуславливает специфич­ность О-антигена в серологических реакциях.

В соответствии с содержанием тех или иных О-антигенов сальмонеллы делят на серологические группы, обозначаемые заглавными буквами латин­ского алфавита. Отдельные антигенные факторы О-антигена обозначаются арабскими цифрами. Некоторые антигенные факторы
О-антигена (далее про­сто О-антигены) называют главными О-антигенами, т.к. они встречаются только в одной из групп сальмонелл и именно они определяют групповую принадлежность бактерий. Другие О-антигены называют малыми, т.к. они встречаются в нескольких или даже многих группах сальмонелл и, следова­тельно, не могут определять их групповую принадлежность. В настоящее время выделено более 50 О-групп сальмонелл.

Одним из компонентов О-антигена является Vi-антиген — полимер N-ацетиламино-гексуроновой кислоты. Он обнаруживается у отдельных се-роваров сальмонелл (S. dublin, S. paratyphi и др.) и некоторых других бакте­рий семейства энтеробактерий (Escherichia, Citrobacter). Vi-антиген затруд­няет серологическую идентификацию сальмонелл в РА, т.к. препятствует агглютинации бактерий в О-сыворотках.

Vi-антиген термолабилен. Он полностью разрушается при кипячении в течение 10 минут, частично инактивируется при нагревании при 60° С в течение часа и под действием фенола, чувствителен к действию соляной кислоты и этанола. Наиболее полное его развитие у соответствующих се-роваров происходит при температуре 37° С.

Жгутиковые или Н-антигены сальмонелл могут существовать в двух, выявляемых в серологических реакциях, фазах: первой и второй (или «спе­цифической» и «неспецифической»).

Антигенные факторы 1-й фазы обозначаются прописными буквами ла­тинского алфавита, антигены 2-й фазы - арабскими цифрами или прописны­ми буквами латинского алфавита с арабскими цифрами. Сальмонеллы, у которых Н-антиген представлен двумя фазами, называются двухфазными, а имеющие антигенные факторы 1-й фазы-монофазными.

Помимо перечисленных основных антигенов, у сальмонелл обнаруже­ны и другие антигены. Среди них — М-антиген (слизистый). Он выявляется у некоторых слизистых штаммов сальмонелл сероваров S. choleraesuis, S. dublin, S. anatum и др. М-антиген — кислый полисахарид. Он нераство­рим в воде, разрушается под действием кислоты и этанола, обладает сла­быми антигенными свойствами.

У ряда сероваров сальмонелл (S. typhimurium, S. choleraesuis,
S. stanley, S. anatum и др.) показано наличие белково-полисахаридного комплекса, отнесенного к К-антигену. Он устойчив к действию кислоты, этанола и обладает выраженными антигенными свойствами.

У сальмонелл имеется несколько видов антигенных вариаций, знание которых необходимо для получения однородных результатов идентифика­ции и правильной их интерпретации.

Н-О-вариации — переход из жгутиковой НО-формы в безжгутиковую О-форму. Встречается редко, но такой переход почти всегда необратим. Некоторые серовары сальмонелл (S. gallinarum-pullorum) существуют только в О-форме.

S-R-вариации — переход от гладких S-форм к шероховатым
R-формам, сопровождающийся качественными и количественными изменениями О-антигена.

О-вариации — количественные изменения О-антигена. Наиболее часто изменениям подвергаются О-антигены 1,6, и 12. Этот тип вариаций антиге­нов связывают с фаговой конверсией сальмонелл.

V-W-вариации (или Vi-вариации) — количественные изменения
Vi-антигена, влияющие на агглютинабельность культур, содержащих этот анти­ген (V-форма — О — инагглютинабельна из-за большого количества Vi-антигена, W-форма не содержит Vi-антиген и агглютинируется
О-сыворотками, VW — форма является промежуточной, т.е. содержит
Vi-антиген, но является О-агглютинабельной).

Н-вариации — качественные изменения жгутиковых антигенов, в ре­зультате чего отдельные антигенные комплексы, входящие в 1-ю и 2-ю фазы, могут присутствовать или отсутствовать.

При идентификации сальмонелл следует помнить и то, что они могут иметь общие антигены не только в пределах их отдельных О-групп, но и с представителями других родов семейства энтеробактерий (Escherichia, Shigella, Klebsiella, Citrobacter). Несмотря на мозаичность и вариабельность антигенной структуры сальмонелл, при их серологической идентификации во внимание принимаются лишь два ос­новных антигена (О и Н). Этот принцип положен в основу диагностической антигенной схемы Кауфмана-Уайта. В этой схеме, в соответствии со струк­турой О-антигенов, сальмонеллы распределены по О-группам с различным числом сероваров, расположенных в пределах этих О-групп в алфавитном порядке в соответствии с обозначением их Н-антигенов 1-й фазы. Факти­чески схема Кауфмана-Уайта представляет собой каталог антигенов саль­монелл, имеющих первостепенную диагностическую ценность. Краткая схема Кауфмана-Уайта, касающаяся антигенной структуры групп саль­монелл, в которые входят патогенные сероварианты бактерий, представ­лена в таблице 26.

входят патогенные для животных сероварианты

(Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, 1994)

Примечание: в скобки взяты антигенные фазы, имеющиеся непостоянно.

Для серологической идентификации с целью окончательного установ­ления родовой принадлежности и определения сероварианта используют чистые культуры бактерий, отнесенные по морфологическим, культуральным и ферментативным свойствам к роду сальмонелл. Для этих целей био­промышленностью выпускаются наборы сывороток сальмонеллезных О-комплексных и монорецепторных О- и Н-агглютинирующих для экспресс-идентификации сальмонелл в РА на стекле. Эти наборы позволяют опреде­лить родовую и серовариантную принадлежность 33 групп сальмонелл, наиболее часто выделяемых от животных, из продуктов животного проис­хождения и объектов внешней среды.

Сыворотки выпускают двумя наборами. В набор № 1 входят О-комплексные сыворотки № 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8. В набор № 2 входят О- и Н-монорецепторные сыворотки.