Обнаружение и идентификация патогенных микобактерий при помощи полимеразной цепной реакции
На животных
Таблица 46 - Дифференциация возбудителей туберкулеза в опыте
Таблица 45- Дифференциация микобактерий по результатам заражения различных животных
Вид животного | Вид микобактерий и результат заражения | ||
бычий | человеческий | птичий | |
Морские свинки | Генерализованный туберкулез через 21-90 дней. На месте введения культуры материала образуется язва, регионарный лимфоузел увеличен, кахексия животных. В регионарных лимфатических узлах выявляют казеозные очаги, селезенка и печень увеличены с сероватыми или желтоватыми очажками, которые имеются и в легких | Абсцесс на месте инъекции и увеличение регионарного лимфатического узла. Изменений в других органах нет | |
Кролики | Генерализованный туберкулез через 21-90 суток с преимущественным поражением легких; в печени и селезенке образуются мелкие очажки, или они отсутствуют | Чаще поражения отсутствуют, могут быть единичные очажки в легких, редко в почках | Сепсис. Гибель через 11-30 суток |
Куры | Нет заболевания и гибели | Гибель в течение 30, реже 60-90 суток. На вскрытии обнаруживается множество серо-желтых бугорков в печени,селезенке, содержащих микобактерий |
По данным ученых более точная дифференциация основных патогенных видов удается при следующих способах и дозах заражения культурами микобактерий (табл. 46).
|
|
Вид животных, доза микобактерий для заражения1) | Вид микобактерий | ||
M. tuberculosis | M. bovis | M. avium | |
Морская свинка (0,01 мг/подкожно) | + + | + + | + |
Кролик (0,01 мг/внутривенно) | + 2) | + + | + + |
Куры (0,1 мг/внутривенно) | - | - | + + |
«-» — нет туберкулеза; «+ +» — генерализованный туберкулез; «+» — локальный туберкулез; 1)достоверные результаты возможны только при точном соблюдении дозы культуры для заражения;2) только легочный туберкулез.
Трудоемкость изоляции и идентификации патогенных микобактерий заставляет применять принципиально новые методы обнаружения возбудителей, в частности полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Зарубежные и отечественные исследователи испытали ряд диагностических тест-систем для обнаружения ДНК патогенных микобактерий при помощи ПЦР в биогенном материале, а также для идентификации уже выделенных культур микобактерий. Авторы считают, что ПЦР может быть использована для контроля благополучия молодняка крупного рогатого скота по туберкулезу и выявления зараженных животных путем регулярных исследований носовой слизи животных. При исследовании послеубойного материала ПЦР уступает по эффективности биологическому методу диагностики.
|
|
В качестве дополнительного метода исследования применяют реакцию связывания комплемента (РСК) с туберкулезным антигеном. Серологические исследования проводят согласно наставлению по диагностике туберкулеза у животных, утвержденного ГУВ МСХ СССР. РСК используют для подтверждения результатов положительной аллергической пробы и отбора животных для диагностического убоя.