Биологическое обогащение пробы в организме белых мышей

Постановка биопробы на ботулинический токсин

Биопробу на ботулинический токсин ставят на белых мы­шах массой 16-18г. С этой целью двум мышам вводят внутрибрюшинно по 0,5мл нативного материала пробы из флакона «б». Контрольными животными в опыте служат че­тыре белых мыши, предназначенные для биологического обо­гащения пробы, которым исследуемый материал вводится в смеси с поливалентной противоботулинической сывороткой.

Для выявления признаков отравления животных ботули­ническим токсином (парез задних конечностей, «осиная та­лия» вследствие паралича диафрагмы, редкое дыхание) за ними устанавливают систематическое наблюдение в течение 44-48ч.

Для биологического обогащения содержащихся в пробе бактерий, риккетсий, хламидий, вирусов используют четы­рех белых мышей массой 16-18г, у которых предваритель­но ослаблена резистентность к инфекции. Последнее дости­гается путем внутримышечного введения в заднюю лапку 5 мг гидрокортизона (0,2мл ацетатной взвеси коммерческо­го препарата, содержащего 25мг гидрокортизона в 1 мл) за 4-5 ч до заражения животных исследуемым материалом.

Подготовленным таким образом белым мышам (4 мыши на пробу) вводят внутрибрюшинно по 1мл пробы с поли­валентной противоботулинической сывороткой (из флакона «в»).

За зараженными животными наблюдают в течение 44 ч. Павших мышей вскрывают немедленно, живых убивают эфи­ром в два срока: через 24 и 44 ч после заражения (по две мыши на срок).

Для исследования с помощью МФА у каждой вскрывае­мой мыши отрезают маленькие кусочки брюшины и селезен­ки и готовят ими мазки-отпечатки на пяти разграфленных на 8 квадратов предметных стеклах:

- на 1-м, 2-м, 3-м и 4-м стеклах - мазки-отпечатки брю­шины (верхний ряд квадратов) и мазки-отпечатки селезенки (нижний ряд квадратов);

- на 5-м стекле - только мазки-отпечатки селезенки (верхний и нижний ряды).

Всего таким образом от каждой мыши готовят по 16 от­печатков брюшины и 22 отпечатка селезенки.

Извлеченные из мышей селезенки помещают в стериль­ные пенициллиновые флаконы и хранят при температуре 2-4⁰С до конца исследования данной пробы.

При наличии в лаборатории мышей-сосунков их исполь­зуют для накопления содержащихся в пробе вирусов. Инфи­цирующим материалом служит взвесь пробы из флакона «д», которую вводят по 0,01 мл в мозг 1-2 - дневным мышам из одной семьи (для одной пробы используют 5-7 сосун­ков).

Вскрытие мышей производят через 24-44 ч. У каждого животного извлекают мозг и готовят из него мазки-отпечатки на 2-3 предметных стеклах. При необходимости из мозга готовят взвеси на изотоническом растворе хлорида натрия для исследования с помощью РНГА.