Суть метода заключается в следующем: на пластины количсетвенно наносят исследуемый экстракт в виде полосы, а по краям – смесь растворов стандартных вещ-в. Хроматографирование проводят в специальных камерах, после этого удаляют растворитель, рассматривают хроматограмму в УФ-свете, отмечают зоны флуоресценции и обрабатывают их реактивами для определения веществ. С помощью этого метода можно распределить препараты и их метаболиты, очистить от примесей, идентифицировать группы препаратов или индивидуальные вещ-ва, количественно оценить анализированный препарат.
Проявители для кислых и слабощелочных: барбитураты – 5% серная к-та и 0,1% р-р дифенилкарбазона в хлороформе; салициловая к-та, пиразолон – 5% железа хлорида (3), для алкалоидов – р-в Драгендорфа.
Проявители для щелочных и слабощелочных: фенотиазин – 10% серная к-та в этаноле; фенотиазин, пиразолон – 5% железа хлорид; алкалоиды – Драгендорф.
Основные этапы изолирования по м-ду Васильевой и Стаса-Отто
М-д Васильевой | М-д Стаса-Отто |
Подготовка объекта к исследованию (взятие навески, измельчение, перенос в емкость) | Подготовка объекта к исследованию (взятие навески, измельчение, перенос в емкость) |
Экстракция вещ-в из твердого тела в жидкость (проводится водой, подкисленной винной или щавелевой к-той до рН 2-3 3 раза) | Экстракция вещ-в из твердого тела в жидкость (проводится спиртом этиловым 96%, подкисленным винной или щавелевой к-той до рН 2-3 3 раза) |
Очистка от соэкстрактивных вещ-в (процеживание вытяжки через тройной слой марли, центрифугирование) | Очистка от соэкстрактивных вещ-в (упаривание объединенной вытяжки до густоты сиропа, осаждение белков абсолютным этанолом) |
Экстракция жидкость-жидкостная (трехкратная экстракция хлороформом из кислой водной вытяжки – кислое хлороформное извлечение КХИ; произв барбитуровой, салициловой к-ты, пурина) | Экстракция жидкость-жидкостная (трехкратная экстракция хлороформом из кислой спиртовой вытяжки – кислое хлороформное извлечение КХИ; |
Подщелачивание кислой водной вытяжки раствором аммиака до рН 9-10; проводим трехкратную экстракцию со щелочной вытяжки хлороформом – щелочное хлороформное извлечение ЩХИ; алкалоиды и синтетические ЛС) | Подщелачивание кислой спиртовой вытяжки раствором аммиака до рН 9-10; проводим трехкратную экстракцию со щелочной вытяжки хлороформом – щелочное хлороформное извлечение ЩХИ; алкалоиды и синтетические ЛС) |
|
|