Работа № 1. Количественное определение холестерина в сыворотке крови по методу Илька

Принцип метода. Холестерин, содержащийся в сыворотке крови, обрабатывается реактивом Либермана-Бурхарда (смесь уксусного ангидрида, ледяной уксусной кислоты и концентрированной Н₂SО₄). При этом холестерин теряет воду и превращается в непредельный углеводород, который с уксусным ангидридом образует зеленое окрашивание. Интенсивность полученной окраски определяется на ФЭКе.

Ход работы. В сухую (!) пробирку поместить 2,1 мл реактива Либермана-Бурхарда и осторожно по стенке пробирки добавить 0,1 мл негемолизированной сыворотки крови. Пробирку тотчас же встряхнуть энергичными движениями 8-10 раз и поместить в термостат при температуре 30°С на 20-25 минут в темноте. Полученную зеленую окраску колориметрировать на ФЭКе при красном светофильтре против дистиллированной воды в кюветах с толщиной слоя 5 мм.

По найденной экстинкции определить количество холестерина в г/л по стандартной кривой.

Клинико-диагностическое значение определения холестерина в сыворотке (плазме) крови. Содержание холестерина в сыворотке крови у человека зависит от возраста. В сыворотке крови здорового взрослого человека содержится 1,5-2,4 г/л (3,63-5,2 ммоль/л) холестерина, у детей - 1,0-1,3 г/л, юношей - 1,3-1,8 г/л, у людей пожилого возраста выше 2,4 г/л. У мужчин старше 60 лет содержание холестерина в сыворотке крови несколько ниже, чем у мужчин 50-60 лет. Это связано с уменьшением продукции и секреции в кровь половых гормонов. Содержание холестерина сыворотке крови женщин детородного возраста ниже, чем у мужчин; после 60 лет половые различия в уровне этого показателя исчезают.

Уровень крови холестерина отражает состояние липидного обмена. Обмен холестерина часто нарушается при различных заболеваниях.

Гиперхолестеринемия (повышение содержания холестерина в крови) отмечается при атеросклерозе, гипертонической болезни, ишемической болезни сердца, дислипопротеинемиях, сахарном диабете, гипотиреозе, подагре, хроническом алкоголизме, заболеваниях печени, почек и др. Гиперхолестеринемия – наиболее документированный фактор риска коронарного атеросклероза.

Гипохолестеринемия (снижение содержания холестерина в крови) возникает при гипертиреозе, голодании, синдроме мальабсорбции, поражении центральной нервной системы, хронических обструктивных заболеваниях легких, острой стадии воспалительного процесса, дефиците альфа-липопротеинов (болезнь Танжера), онкологических заболеваниях.