Работа № 2. Выделение миоглобина из мышечной ткани

Ход работы. Красную мышцу животного (2 – 3 г) очистить от жира и соединительной ткани, тщательно измельчить ножницами и залит 15 мл 0,3% раствора аммиака. Полученную смесь оставить на 30 мин при комнатной температуре, периодически перемешивая. Затем профильтровать щелочной экстракт через бумажный фильтр. К фильтрату красного цвета добавить несколько капель концентрированной соляной кислоты. Отметить изменение красной окраски в коричневую, обусловленную переходом гемма ммиоглобина в гемин.

Работа №3. Количественное определение креатинина в моче по Яффе.

Принцип метода. Метод основан на способности креатинина в щелочной среде взаимодействовать с пикриновой кислотой с образованием пикрата креатинина оранжево-красного цвета.

Ход работы. Приготовить опытную пробу:в цилиндр объемом 100 мл внести 0,5 мл мочи и 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Смесь тщательно встряхнуть и добавить 0,2 мл 10% раствора едкого натра, выдержать 10 мин при комнатной температуре и довести дистиллированной водой до 100 мл. Приготовить контрольную пробу: к 3 мл раствора пикриновой кислоты добавить 0,2 мл 10% раствора едкого натра и довести объем смеси дистиллированной водой до 100 мл. Приготовить стандартную пробу: к 0,5 мл стандартного раствора (содержит 8,8 ммоль/л, или 1 г/л креатинина) прилить 3 мл раствора пикриновой кислоты и 0,2 мл 10% раствора едкого натра, выдержать 10 мин при комнатной температуре и довести дистиллированной водой до 100 мл. Интенсивность окраски опытной и стандартной проб измерить на ФЭКе против контрольного раствора в кювете с толщиной слоя 10 мм при зеленом светофильтре.

Расчет: концентрация креатинина(моль/сут) = (Е_оп/Е_ст) × 8,8

Норма: 4,4 – 17,6 моль/сут, или 0,5 – 2 г/сут.

Клинико-диагностическое значение. Содержание креатинина в моче зависит от характера питания, увеличиваясь при употреблении мясной пищи. Повышение его экскреции с мочой наблюдается при усиленной мышечной работе, лихорадочных состояниях, пневмонии авитаминозе Е, тиреотоксикозе и др.; понижение экскреции с мочой наблюдается при мышечной атрофии, лейкемии, амилоидозе почек, голодании.