Задания к лабораторному занятию. 1. Определить эффективность действия дезинфицирующих средств методом “тест-объектов”

1. Определить эффективность действия дезинфицирующих средств методом “тест-объектов”.

2. Провести определение эффективности антимикробных консервантов лекарственных средств.

3. Провести выделение микробов-антагонистов из почвы методом “скученных пластинок”.

4. Определить активность микроба-антагониста по зоне задержки роста испытуемого микроба.

5. Провести выделение бактериофага и подтвердить его литическую силу.

6. Провести титрование бактериофага на жидких питательных средах.

РАЗДЕЛ: ”ХИМИОТЕРАПИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ”.

Цель: Дать общую характеристику химиотерапевтических препаратов, знать предъявляемые к ним требования, изучить основные группы химиопрепаратов, ознакомиться с классификациями антибиотиков, проявлениями микробного антагонизма. Изучить побочное действие химиотерапевтических препаратов и антибиотиков; меры профилактики при лечении инфекционных процессов. Освоить методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным химиотерапевтическим препаратам.

Вопросы для самоподготовки

1. Понятие о химиотерапии. Значение работ П. Эрлиха, Д. Л. Романовского.

2. Основные группы химиотерапевтических препаратов.

3. Сульфаниламидные препараты, их классификация.

4. Противотуберкулёзные препараты.

5. Противовирусные препараты.

6. Понятие об антибиотикотерапии. Этапы становления науки об антибиотиках.

7. Характеристика антибиотиков. Единица измерения антибиотической активности.

8. Классификация антибиотиков.

9. Микробный антагонизм.

10. Основные правила использования антибактериальных химиопрепаратов.

11. Антибиотикорезистентность микроорганизмов.

12. Побочное действие антибактериальных химиопрепаратов на человеческий организм.

13. Профилактика лекарственной аллергии.

Литература

1. Дикий И.Л., Холупяк И.Ю., Шевелева Н.Е., Стегний М.Ю. Микробио­ло­гия. – Х.: Прапор, Издательство УкрФА, 1999. – С. 165-183.

2. Н.П.Елинов, Н.А.Заикина, И.П.Соколова. Руково­дство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1988. – С. 124-132.

Идеальным требованием для рациональной и целенаправленной терапии бактериальных инфекций является тщательная бактериологическая диагностика заболевания с выделением, идентификацией возбудителя и определением его чувствительности к назначаемому препарату. Оправданность такого подхода диктуется необходимостью выбора наиболее эффективного препарата среди многих близких по спектру действия, а также возможной устойчивостью микроорганизмов к назначаемым антибиотикам. Это особенно важно в связи с широким распространением антибиотикоустойчивых штаммов различных микроорганизмов.

Для определения чувствительности микробов к антибактериальным химиопрепаратам существует ряд методов, среди которых наиболее распространены: метод последовательных разведений в жидкой питательной среде или питательном агаре, метод диффузии в агар (метод дисков, насыщенных антибиотиками) и ряд ускоренных методов.

Определение чувствительности микробов к антибактериальным химиопрепаратам in vitro проводится в условиях, значительно отличающихся от тех, в которых препарат действует в организме. На его результаты большое воздействие оказывают такие факторы, как состав и рН питательной среды, величина посевной дозы, возраст культуры, условия культивирования и др. При использовании метода диффузии в агар на результаты исследований влияют толщина слоя питательной среды, её влажность, скорость диффузии препаратов, скорость роста исследуемых микроорганизмов и др.

Питательные среды для определения чувствительности микробов к антибактериальным химиопрепаратам

Среды для определения чувствительности должны отвечать следующим требованиям:

1) быть стандартными и обеспечивать оптимальные условия роста микроорганизмов;

2) не содержать ингибиторов бактериального роста и чрезмерного количества стимуляторов;

3) не содержать веществ, подавляющих действия антибактериальных химиопрепаратов.

Взятие проб. Материал для посева из горла, ран, язв следует брать стерильным ватным тампоном. Экссудат из полостей (плевры, брюшной полости, суставов, абсцессов) набирают стерильным шприцем. Кровь из вен желательно брать в период пика температурной кривой. При взятии проб мочи следует соблюдать условии асептики. В исследовании используют осадок, полученный при центрифугировании мочи.

Выделение чистых культур и идентификация микробов производится по правилам бактериологической техники.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом “бумажных дисков”

Этот метод является наиболее простым, быстрым, доступным и широко используемым, его проводят, прежде всего, для оценки эффективности антибиотиков в клинических условиях. Он является качественным методом, позволяющим установить лишь факт чувствительности или устойчивости возбудителя инфекции к данному антибиотику.

Определение чувствительности проводят с чистыми культурами бактерий, однако, в ряде случаев с целью быстрого получения ориентированных данных о чувствительности микроорганизмов для исследования используют непосредственно патологический материал.

Питательную среду разливают в чашки Петри, помещённые на строго горизонтальной поверхности, заполнив их на одинаковую высоту 4 мм (25 мл среды для чашек с внутренним диаметром 9 см). Перед посевом поверхность среды должна быть подсушена для того, чтобы посевной материал мог легко всасываться.

Взятый тампоном материал для исследования помещают в стерильную пробирку, в которую добавляют 1,5 мл физиологического раствора или бульона, встряхивают для получения смыва. Клинический материал или культуру микроорганизма, выделенную от больного, засевают на поверхность застывшего агара в чашку Петри, равномерно распределяют путем покачивания чашки. Избыток жидкости удаляют пипеткой. Чашки подсушивают в течение 30-40 мин. при комнатной температуре.

После впитывания жидкости в агар на него прокаленным пинцетом накладывают диски, слегка придавливая, на равномерном расстоянии друг от друга и на расстоянии 2 см от края чашки. На одну чашку помещают 6 дисков.

Диски представляют собой небольшие кружки диаметром 6 мм, сделанные из специального картона, пропитанные определённым количеством разных антибиотиков. Содержание антибиотиков в диске, указанное на этикетке, соответствует рекомендациям ВОЗ.

После наложения дисков чашки выдерживают при комнатной температуре в течение 30 минут. Чашки помещают в термостат на 18-24 часа при температуре 37 ºС в перевернутом кверху дном положении, после чего учитывают результаты.

Если испытуемая микробная флора чувствительна к одному из антибиотиков, вокруг соответственного диска образуется зона задержки роста и тем большая, чем сильнее действие антибиотика. Измеряют диаметры зон задержки роста микробов вокруг дисков, включая диаметр самих дисков, с помощью линейки или измерителя с точностью до 1 мм.

Единичные колонии или тонкая плёнка роста внутри зоны задержки роста не учитываются. Отсутствие зоны задержки роста микроба вокруг диска свидетельствует о том, что испытуемый штамм не чувствителен к данному антибиотику. При зоне задержки роста микроба диаметром до 10 мм, штамм расценивается как малочувствительный. Зона задержки роста микроба более 10 мм указывает на чувствительность штамма. Чем больше зона задержки роста микроба более 10 мм указывает на чувствительность штамма. Чем больше зона задержки роста, тем выше чувствительность микроорганизмов к антибиотику.

В ответе должно быть написано, какой чувствительностью обладает исследуемая культура, а не размер зоны задержки роста.

Для терапии данной инфекции рекомендуют те антибиотики, вокруг дисков, которых получены наибольшие зоны задержки роста.