Метод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде

Мясо-пептонный бульон (или бульон Сабуро, или другой, на котором растет изучаемый микроб) разливают по 1 мл в пробирки, расставленные в штативы по 10 в ряду. В первую пробирку вносят 1 мл раствора антибактериального химиопрепарата в нужной концентрации (для антибиотиков удобной концентрацией для основного раствора является 200 мкг/мл или ед/мл). Основные растворы антибиотиков стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 недели.

После тщательного перемешивания переносят мерной пипеткой 1 мл из этой пробирки во вторую, перемешивают и переносят тоже количество смеси из второй в третью и т. д. до девятой пробирки, из которой 1 мл выливают, чтобы во всех пробирках объем жидкости был одинаков. Десятая пробирка, не содержащая препарат, служит контролем на рост культуры микроорганизма.

После этого во все пробирки, содержащие серийно разведенный препарат, и в контрольную пробирку вносят одинаковое количество во взвеси тест-культуры. Для этого 18-ти часовую культуру (для микроорганизмов, рост которых замедлен, используют 48-ми часовую культуру) испытуемого микроба на косом агаре смывают физиологическим раствором, доводят до густоты 5 ЕД по стандарту мутности с последующим разведением до нужного количества микробных клеток в 1 мл и вносят в пробирки с серийно разведенным препаратом. Результаты учитывают, определяя наличие или отсутствие роста микроба в среде, содержащей различные разведения антибактериального химиопрепарата. Последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон) соответствует МПК препарата в отношении испытуемого штамма и указывает на степень его чувствительности. Если среда помутнела во всех пробирках, то испытуемый микроб устойчив к максимально взятой в опыт концентрации антибактериального химиопрепарата. Отсутствие роста во всех пробирках, кроме контрольной свидетельствует о том, что МПК препарата в отношении микроба ниже используемой концентрации.

Для определения бактерицидной концентрации из 2-3 последних пробирок с отсутствием видимого роста производят посев на агар или бульон. Через 24-48 часов инкубации в термостате отмечают ту наименьшую концентрацию антибактериального химиопрепарата в пробирке, посев из которой не дал роста, и принимают за минимальную бактерицидную концентрацию (МБК).