Определение чувствительности бактерий к антибактериальным химиопрепаратам методом диффузии в агар

Подбирают одинакового размера чашки Петри, устанавливают их на горизонтальную поверхность (отрегулированную по ватерпасу), наливают 10 мл незараженного “голодного” агара. После застывания этого слоя на него помещают стерильные цилиндры из стекла или нержавеющей стали (высота 10 мм, внутренний диаметр 6 мм) и заливают их “зараженным” агаром в количестве 15 мл. Для этого растопленный и охлажденный агар добавляют к агаровому смыву суточной культуры или к смыву, полученному из патологического материала. Густоту взвеси определяют по стандарту мутности № 5 с последующим разведением до нужного количества микробных клеток в 1 мл.

По застывании второго слоя агара цилиндры вынимают и в образовавшиеся лунки вносят испытуемые химиопрепараты антибактериального действия. В каждую лунку помещают 0,3 + (-) 0,05 мл исследуемого препарата. Мазевые формы вносят в лунку до полного ее заполнения. В одной чашке Петри можно испытать активность шести образцов различных препаратов.

Посевы термостатируют при t 37 º C в течение 24-48 часов, затем учитывают результаты. Измеряют зоны задержки роста тест-микроба, отчетливо видных вокруг лунок. Высокочувствительными к данному антибиотику считают микроорганизмы, дающие при его действии зоны задержки роста, превышающие 25 мм, чувствительными - 15-25 мм, малочувствительными – 11-15 мм.

Оценка результатов аналогична приведенной в описании метода “бумажных дисков”.

Метод последовательных разведений антибактериальных химиопрепаратов в питательной среде является более надежным и точным количественным методом

Установление степени чувствительности к ряду антибактериальных препаратов микроба, вызывающего инфекционный процесс, влияет на выбор химиопрепарата (отказ от препаратов, характеризующихся относительно высокой токсичностью при умеренной чувствительности к ним возбудителя), его дозировку (концентрация антибиотика в крови в 2-3 раза должна превышать его МПК в отношении возбудителя) и режим введения.

Существуют две модификации метода определения чувствительности микробов к антибактериальным химиопрепаратам на жидкой и на плотных питательных средах. Метод дает возможность определить минимальную подавляющую рост концентрацию препарата (МПК) для выделенного штамма возбудителя. Он заключается в приготовлении ряда последовательных разведений антибактериального химиопрепарата в питательной среде с внесением во все разведения исследуемой культуры. По подавлению роста микроба определённой концентрацией препарата в питательной среде судят о степени чувствительности микроорганизма. Ряд разведений химиопрепарата в жидкой питательной среде служит для определения чувствительности данного штамма. На чашке Петри с плотной питательной средой можно определить чувствительность большого числа штаммов (20 и более при посеве штрихом или с помощью штампа-репликатора).

Метод серийных разведений в плотной питательной среде даёт возможность определить чувствительность к антибактериальным химиопрепаратам отдельных вариантов штамма. При использовании жидкой среды выявляется чувствительность штамма в целом.

При определении чувствительности методом серийных разведений необходимо выделение возбудителя в чистой культуре.

Различают бактерицидное (убивающее микробы) и бактериостатическое (задерживающее рост микробов) действие препаратов. В отношении противогрибковых препаратов говорят о фунгицидной (фунгистатической) активности.