Методы, основанные на использовании меченых реагентов

В настоящее время разработано много методов, предусматривающих применение меченых антител и антигенов. Чаще с этой целью используют радиоактивную или ферментную метку.

Радиоиммунологические методы

В радиоиммунологическом анализе специфичность реакции антиген-антитело сочетается с высокой чквствительностью, обеспечиваемой применением радиоактивной метки. В качестве метки чаще применяют радионуклиды йода (¹³¹J или ¹²⁵J). Возможность проводить конкурентный анализ, а также анализ в жидкой или твердой фазе приводит к созданию большого числа различных методик.

Для определения антигенов используют классический радиоиммунологический анализ (РИА). В основу РИА положен принцип конкурентного взаимодействия определяемого немеченого антигена и известного количества меченого антигена с активными центрами антител. При этом происходит вытеснение меченого антигена из его комплекса с антителом вследствие последующего добавления больших концентраций немеченого антигена или гаптена той же специфичности. Реакция (при высоком разведении ингредиентов) подчиняется закону действующих масс: вытеснение меченого антигена пропорционально введенному количеству немеченого антигена или гаптена. Конкуренцию между определяемым и меченым антигенами можно оценить количественно с помощью радиометрии, предварительно определив образовавшиеся иммунные комплексы от несвязавшегося меченого антигена. Концентрацию определяемого антигена рассчитывают, исходя из сравнения соотношений свободного и связанного меченых реагентов с соответствующим стандартом.

Применяют также так называемые твердофазные методы. В качестве твердофазного носителя используют поверхности планшетов с лунками, бус, пленками из полистирола или других полимерных синтетических материалов. Адсорбированные (иммобилизированные) антигены и антитела длительное время сохраняют способность вступать в серологические реакции. Существуют различные модификации проведения твердофазного РИА: конкурентный метод, обратный метод, непрямой метод.

РИА используют для определения антигенов вирусов гепатита, СПИДа, в лабораторной диагностике легионеллеза, дифтерии и других инфекций. Этот метод весьма эффективен при диагностике аллергии. Аллерген, иммобилизованный на сорбенте, инкубируют с сывороткой больного, после чего добавляют радиоактивно меченые анти-JgE-антитела.