Принципиальная схема иммунизации лошади

Через 4-5 дней вводят п/к 5-10-20-40-80-100-120-150 мл антигена. На 7-е сутки — пробное кровопускание На 10-е сутки — 5 л крови (у лощади всего 25 л крови) Отдых 2-3 недели Иммунизация по схеме 4—5 циклов иммунизации Отдых 2-3 месяца 10—12 циклов иммунизации Тотальное кровопускание (10-15 л).

Полученную кровь собирают в цилиндры. После свертыва­ния и отделения сгустка образуется прозрачная часть —нативная сыворотка. К ней добавляют консервант (чаще хлороформ), про­гревают при 60º С, охлаждают до 6-8 °С, и отстаивают. При этом в осадок выпадают нестойкие белки и титр антител в сыворотке ста­билизируется. Затем сыворотку титруют, то есть определяют в ней расчетное содержание иммунных антител. Силу сыворотки опреде­ляют в ME. За 1 ME принимается то минимальное количество сы­воротки, которое нейтрализует установленную дозу токсина.

Титрование сывороток проводится тремя методами: по Рамону in vitro; по Эрлиху in yivo; по Ремеру in vitro.

После определения количества антител в сыворотке ее очи­щают от балластных белков-альбуминов, с которыми не связаны их защитные свойства. Затем сыворотку подвергают очистке и кон­центрируют. Концентрация сыворотки основана на выделении и растворении выделенных активных фракций в меньшем объеме по сравнению с исходным — нативной сывороткой. Это позволя­ет вводить в организм препараты с меньшим содержанием чуже­родных для организма человека белков.

Методы очистки и концентрации:

пропускание через сыворотки на холоде углекислого газа, при этом глобулины выпадают в осадок;

высаливание сывороток на холоде сернокислым аммонием с последующим диализом и т. д.

В настоящее время для чистки и концентрации сывороток используется метод «Диаферм-3». Метод основан на фракциони­ровании сывороток сернокислым аммонием; обработке их пепси­ном с последующим диализом в течение 40—42 часов.

Для диализа у сывороток устанавливают рН == 7,3. Для удале­ния оставшихся балластных белков сыворотку эмульгируют хло­роформом (30 % по объему), при этом в осадок выпадает послед­няя порция балластных белков. Хлороформ затем удаляют центрифугированием. Около 70 % сывороточных белков (имму-нологически неактивных) удаляется, а остается глобулиновая фрак­ция — антитела.

Оставшуюся прозрачную жидкость стерилизуют фильтрацией; титруют; испытывают на пирогенность, безвредность и стериль­ность; разливают в ампулы, запаивают, этикетируют.