Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Это циклический процесс увеличения в геометрической прогрессии копий определенного фрагмента ДНК, протекающий под воздействием термостабильной ДНК-полимеразы

Впервые описана в 1985 г. Saiki и соавторами.

Сущность метода:

Это циклический процесс увеличения в геометрической прогрессии копий определенного фрагмента ДНК, протекающий под воздействием термостабильной ДНК-полимеразы и при строго заданных временных и температурных режимах. В качестве затравки для одновременного синтеза комплементарных цепей с противоположных концов матрицы используют 2 олигонуклеотида-праймера, способные специфически гибридизоваться с последовательностями нуклеотидов на противоположных концах 2 цепей участка ДНК.

В ходе повторяющихся циклов:

а) денатурация ДНК (температурный или щелочной гидролиз);

б) отжиг праймеров;

в) синтез ДНК-нитей, комплементарных матрице, ограниченной праймерами, цепей с помощью ДНК-полимеразы. Экспоненциально увеличивается количество дискретного фрагмента, фланкированного последовательностями нуклеотидов, соответствующих первичной структуре праймеров. В результате 30 циклов амплификации на базе одной молекулы ДНК можно получить более 1 млн копий необходимого участка ДНК – количества, достаточного для анализа с помощью других молекулярно-биологических методов (молекулярная гибридизация, гельэлектрофорез в присутствии бромистого этидия и др.)

Метод используется для диагностики многих вирусных инфекций в случаях недостаточного количества исследуемого материала; позволяет выявить нуклеиновые кислоты возбудителя не только из свежего материала, но и из высушенных и даже фиксированных препаратов; при отсутствии в крови АТ или при их недостаточном уровне для проведения серодиагностики.

Например: ПЦР позволяет обнаружить геном ВИЧ, встроенный в геном пораженных лимфоцитов, в случаях невозможности использования серологических методов.