Идентификация и дифференцирование выделенной культуры

На третий день исследований проверяют чистоту культуры, готовят мазки из выросшей культуры и окрашивая их. Если культура чистая, т.е. в мазке присутствует только один вид микроорганизмов, производят посевы для определения биохимических свойств микроорганизмов, т.е. идентификации.

Биохимические свойства микробов.

Сахаролитические свойства Протеолитические свойства

В жизнедеятельности микробов ферменты играют большую роль. Они являются обязательными участниками разнообразных биохимических реакций, реакций лежащих в основе питания, дыхания, размножение микробов. Каждый микроорганизмов продуцирует постоянный для него набор ферментов. Одни, из которых расщепляют белки и углеводы, а другие вызывают окисление и восстановление различных субстратов. Изучение биохимических свойств используется для изучения видов и типов бактерий. Обнаружение ферментов бактерий идет с использованием различных компонентов, входящих в состав питательных сред.

Расщепление углеводов - сахаролитическая активность, т.е. способность расщеплять сахара и многоатомные спирты с образованием кислоты или кислоты и газа, изучают на средах Гисса, которые содержат тот или иной углевод и индикатор. Под действием образующейся при расщеплении углевода кислоты индикатор изменяет окраску среды. Микробы, не ферментирующие данный углевод, растут на среде, не изменяя ее. Наличие газа устанавливают по образованию пузырьков в средах с агаром.

Протеолитические свойства - т.е. способность расщеплять белки и полипептиды изучают на средах с желатином и питательном бульоне. При росте микроорганизмов в питательном бульоне расщепление белков может происходить с выделением индола, сероводорода, аммиака. Их обнаруживают с помощь индикаторных бумажек. Фильтровальную бумагу заранее пропитывают определенными растворами, затем полоски вставляют под пробку. Аммиак вызывает посинение лакмусовой бумажки; при выделении сероводорода – бумажка чернеет, индол вызывает покраснение бумажки.

Биохимические свойства могут изучать с применением специальных микротестсистем и приборов. Для этого используют полистироловые пластины, с изолированными лунками, содержащие высушенные дифференциально-диагностические среды. При внесении небольшого количества суспензии испытуемой чистой культуры, среда в лунках восстанавливается, а при последующей инкубации в термостате культура вырастает в лунках, проявляя свои характерные изменения на соответствующих средах. Учет цветовых изменений производят визуально.

Результат изменений (мутность, цветность) в полистироловых пластинах может производиться в приборах – спектрофотометрах автоматически, с последующей обработкой на компьютере.

Весь учет результатов проводят на 4 день исследований, выписывают ответ.

Задания для самостоятельной работы

1) Разработать алгоритм действий медсестры при взятии разных видов материала, у разных возрастных категорий пациентов;

2) Взять мазок из зева при подозрении на дифтерию.

3) Заполнить направление.

4) сделать посев тампоном материала, взятого из зева и носа, на сектора чашки.

5) определить количество видов колоний на чашке Петри, описать их и зарисовать.

6) заполнить бланк анализа