Занятие №12

Тема. Нарушение системы лейкоцитов.

Цель занятия. Изучить причины и механизм развития лейкоцитозов и лейкопений. Научить оценивать по анализу крови характер нарушений в системе лейкоцитов.

Теоретические вопросы:

1. Лейкоцитозы, определение. Понятие физиологических и патологических лейкоцитозов.

2. Классификация лейкоцитозов по характеру изменения лейкоцитарной формулы.

3. Типы ядерного сдвига гранулоцитов при патологии белой крови, его диагностическое значение.

4. Основные этиологические факторы развития лейкоцитозов.

5. Лейкопении, определение, виды, причины развития, последствия для организма.

6. Агранулоцитозы, причины, механизм развития, проявления.

7. Лейкемоидные реакции, виды, этиология, патогенез, изменения кроветворения.

8. Отличие лейкемоидных реакций от лейкозов.

Работа №1. Качественная и количественная характеристика лейкоцитов при воспалительной реакции и токсическом поражении костного мозга.

Материальное оснащение.

1. Пробирки простые 2. Штатив на 5 гнезд	- 2 шт. - 2 шт.
3. Пипетки на 1 мл	- 3 шт.
4. Стеклянная палочка в стакане	- 1 шт.
5. Стакан с марлевыми тампонами	- 1шт.
6. Лезвие для безопасной бритвы	- 1 шт.
7. Счетная камера и шлифованное покровное стекло к ней	- 1 шт.
8. Обезжиренные предметные стекла	- 2 шт.
9. Стекло со шлифованными гранями	- 1 шт.
10. Ванночка для окраски мазков со стеклянными рельсами	- 1 шт.
11. 11-клавишный счетчик для подсчета лейкоцитарной формулы	- 1 шт.
12. Микроскоп	- 1 шт.
13. Реактив Тюрка (3% раствор уксусной кислоты, подкрашенный несколькими каплями раствора метиленового синего)	- 10 мл
14. Этиловый спирт (960)	- 10 мл
15. Смесь Никифорова	- 100 мл
16. Краска Романовского-Гимза (1мл краски на 9 мл дистиллированной воды)	- 10 мл
17. Иммерсионное масло в масленке	- 10 мл
18. Животные: крыса с воспалительной реакцией крыса с токсическам поражением костного мозга крыса интактная	- 1 шт. - 1 шт. - 1 шт.

Методика проведения опыта:

Для воспроизведения воспалительной реакции крысе за двое суток до занятия вводят подкожно 0,5мл скипидара. Токсическое поражение костного мозга вызывают путем ежедневного (в течение 5-7 дней) подкожного введения бензола в дозе 0,1 мл на 100 г массы животного.

В день занятия у опытных и контрольной (интактной) крыс определяют количество лейкоцитов в 1 мкл крови и подсчитывают лейкоцитарную формулу.

Для определения числа лейкоцитов берут 0,02 мл крови в пробирку с заранее налитым реактивом Тюрка в количестве 0,4 мл (уксусная кислота лизирует эритроциты, а метиленовый синий окрашивает ядра лейкоцитов). При этом кровь разводят в 20 раз. Пробирку тщательно встряхивают, и стеклянной палочкой каплю разведенной крови вносят в счетную камеру.

Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах сетки Горяева под малым увеличением (окуляр – 7^х, объектив – 8^х) микроскопа. Число лейкоцитов (Л) вычисляют по формуле:

Л = (А · С · 250)/В, где

А – сумма клеток, подсчитанных в больших квадратах сетки;

В – количество сосчитанных больших квадратов (100);

С – разведение крови (в 20 раз);

250 – множитель, приравнивающий объем большого квадрата (1/250 мм³) к 1 мм³.

Лейкоцитарную формулу подсчитывают в окрашенных мазках крови. Для этого мазок крови, приготовленный обычным способом, высушивают на воздухе, маскируют простым карандашом и фиксируют в смеси Никифирова в течение 5 мин. Затем препарат окрашивают краской Романовского-Гимза в течение 20-25 мин. Окрашенный мазок крови опаласкивают водопроводной водой и высушивают.

Под иммерсионной системой микроскопа (окуляр – 15х, объектив 90х) дифференцируют на менее 100 лейкоцитов. Лейкоциты подсчитывают с помощью 11-клавишного счетчика, придерживаясь следующего правила: отступив 2-3 поля зрения от края мазка, затем 3-5 полей зрения вдоль края мазка, затем 3-5 полей зрения под прямым углом по направлению к середине мазка, вновь 3-5 полей зрения параллельно краю, затем под прямым углом по направлению к краю и т.д. Таким образом, предметное стекло двигают зигзагообразно. Подсчитав около половины числа лейкоцитов на одной стороне мазка, меняют положение стекла и другую половину клеток подсчитывают на противоположной стороне.

При изучении лейкоцитарной формулы необходимо дифференцировать неразрушенные лейкоциты. Обращают внимание на форму и размеры клетки, характер окраски цитоплазмы и ядра и т.д.

Полученные результаты у подопытных крыс сопоставляют с контролем. В заключении обсуждают механизмы изменений числа и состава лейкоцитов при изученной патологии.

Работа №2. Характер изменений лейкоцитарной формулы при лейкоцитозах.

Материальное оснащение.

1. Мазки крови больных: с лейкоцитозом с лейкопенией	- 5 шт. - 5 шт.
2. 11-клавишный счетчик для подсчета лейкоцитарной формулы	- 1 шт.
3. Стеклянная палочка в стакане	- 1 шт.
4. Стакан с марлевыми тампонами	- 1 шт.
5. Микроскоп	- 1 шт.
6. Иммерсионное масло в масленке	- 10 мл

Ход анализа.

Под иммерсионной системой микроскопа (окуляр – 15х, объектив – 90х) изучают по общепринятой методике (подробнее см. в работе 1) окрашенные мазки крови больных лейкоцитозом и лейкопенией. Обращают внимание на наличие в крови незрелых форм лейкоцитов (миелоцитов, метамиелоцитов и палочкоядерных нейтрофилов), патологически измененных (вакуоли, токсическая зернистость в цитоплазме; пикноз, набухание или гиперсегментация ядра и др.) и разрушенных клеток. Одновременно оценивают состояние красной крови.

Обнаруженные незрелые и патологически измененные лейкоциты зарисовывают в тетрадях. По результатам гематологических исследований делают соответствующее заключение и выводы.

Работа №3. Решение ситуационных задач по теме.