Б. Непрямая реакция. В центрифужную пробирку наливают 0,5 мл сыворотки, в которой не наблюдается прямой реакции с диазореактивом Эрлиха

В центрифужную пробирку наливают 0,5 мл сыворотки, в которой не наблюдается прямой реакции с диазореактивом Эрлиха. Затем прибавляют 1 мл этилового спирта для осаждения белков. Содержимое пробирки хорошо перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. Центрифугат сливают в другую пробирку, куда добавляют 0,25 мл диазореактива. Появление розовой окраски свидетельствует о наличии в сыворотке крови непрямого билирубина. Анализ проводят в опытной иконтрольной пробах.

Работа №2. Количественное определение билирубина в сыворотке крови по Бокальчуку.

Материальное оснащение.

1. Пробирки простые – 10 шт.

2. Штатив на 5 гнезд - 2 шт.

3. Пипетки на 1 мл - 3 шт.

4. 0,85% раствор хлорида натрия - 10 мл

5. Диазореактив Эрлиха - 3 мл

6. Сыворотка крови больного

желтухой - 2 мл

7. Сыворотка крови здорового

человека - 2 мл

Ход анализа.

В пять пробирок (опытные пробы) наливают по 1 мл физиологического раствора. В первую пробирку прибавляют 1 мл сыворотки крови больного желтухой. Затем в каждую последующую пробирку из предыдущей переносят по 1 мл жидкости; из последней пробирки 1 мл жидкости удаляют. В результате получается ряд разведении (1:2; 1:4; 1:8; 1:16; 1:32) сыво­ротки крови. Далее во все пробирки добавляют по 0,2 мл диазореактива Эрлиха; содержимое их встряхивают. Через 2-3 мин выясняют кратность разведения сыворотки крови, при которой появляется розовое окрашивание раствора.

Аналогичное исследование проводят с сывороткой крови здо­рового человека.

Схема количественного определения билирубина.

Компоненты	Номера пробирок
						Примечание
Физраствор	1 мл	1 мл	1 мл	1 мл	1 мл	1 мл
Испытуемая сыворотка	В каждую последующую пробирку, начиная со 2-й, переносится по 1 мл смеси из предыдущей.	Из последней пробирки 1 мл содержимого удаляется
Разведение	1:2	1:4	1:8	1:16	1:32	1:64
Диазореактив	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5

Концентрацию билирубина в сыворотке (С, мг%) рассчи­тывают по формуле:

С = A · 0,0156, где

А - степень разведения сыворотки крови;

0,0156 - наименьшее количество билирубина, при

котором диазореакция положительная.

Полученная величина умножается на 100 (коэффициент пересчета на 100 мл сыворотки крови).

Работа №3. Качественное определение билирубина в моче (проба Розена).

Материальное оснащение:

1. Пробирки простые - 2 шт.

2. Пипетка на 2 мл - 1 шт.

3. Пипетка на 5 мл - 1 шт.

4. Штатив на 5 гнезд - 1 шт.

5. 1% спиртовый раствор йода -10 мл

6. Моча больного желтухой - 20 мл

7. Моча здорового человека - 20 мл

Ход анализа:

В пробирку (опытная проба) наливают 5 мл мочи больного желтухой и на нее наслаивают 2 мл 1% спиртового раствора йода. При наличии билирубина в пробе на границе жид­костей появляется зеленое кольцо.

Аналогичное исследование проводят с мочой здорового че­ловека (контрольная проба).

Работа №4. Качественное определение уробилина в моче (проба Богомо­лова).

Материальное оснащение:

1. Пробирки простые - 4 шт.

2. Штатив на 5 гнезд - 1 шт.

3. Пипетка на 1 мл - 1 шт.

4. Пипетки на 5 мл -2 шт.

5. Пипетка на 10 мл - 1 шт.

6. Воронки стеклянные - 2 шт.

7. Фильтровальная бумага - 5 шт.

8. Насыщенный водный раствор

медного купороса - 10 мл

9. Соляная кислота концентри­рованная - 5 мл

10. Хлороформ медицинский (очищенный) - 20 мл

11. Моча больного желтухой - 20 мл

12. Моча здорового человека - 20 мл

Ход анализа.

К 10 мл профильтрованной мочи прибавляют 3 мл раствора медного купороса. При помутнении жидкости (образуется гидрат окиси меди) добавляют 2-3 капли концентрированной соляной кислоты до просветления жидкости. Через 5 мин прибавляют 3 мл хлороформа; смесь несколько раз встряхивают.

При наличии уробилина в пробе хлороформ окрашивается в интервале от бледно-розового до кирпично-красного цвета в зависимости от концентрации этого пигмента в исследуемой моче.

Одновременно изучают оба (опытный и контрольный) образца мочи.

Результаты всех проведенных анализов сопоставляют и обобщают. Исходя из полученных данных, определяют тип желтухи у обследованного больного. В заключении обсуждаются вероятные механизмы развития выявленного типа желтухи.

Работа №5. Решение ситуационных задач по теме.