Оборудование и реактивы:
Колбочки на 100 мл; мерные колбочки на 100 мл; пипетки; бюретка; фарфоровая ступка; СаСО3; H2SО4 10%-ная; 0,1 н. КМnО4; CuSO4; Pb(CH3COO)2; Fe2(SO4)3 c = 0,1 М; 3% раствор перекиси водорода (приготовленный из таблетки).
Ход работы:
Навеску 5 г свежего растительного материала растирают в ступке со стеклянным песком и 0,3 г СаСО3, затем добавляют 20 мл воды и снова тщательно растирают до получения однородной массы. После этого растертую массу водой количественно переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем болтушки до метки. Через 30 – 40 минут смесь фильтруют. Четыре порции чистого фильтрата (по 20 мл) помещают в колбы на 100 мл. В три колбы добавляют по 1 мл растворов солей. В четвёртую 1 мл воды. Во все колбы приливают по 20 мл воды и по 3 мл 1%-ного раствора перекиси водорода. Время инкубации от 20 до 30 минут. По окончании инкубации к содержимому всех колб добавляют 4 – 5 мл 10%-него раствора H2SO4 и титруют 0,1 н. раствором KMnO4 до слабо-розовой окраски, не исчезающей в течение минуты. По разности между контрольным и опытными титрованиями определяют количество разложившейся перекиси водорода за время инкубации в расчете на 1 г исходного растительного вещества.
,
где c – активность каталазы в миллиграммах Н2О2, разложившейся за время инкубации на 1 г растительного вещества;
а – миллилитров 0,1 н. раствора КМnO4, израсходованного на холостое титрование;
б – миллилитров 0,1 н. раствора КМnО4, пошедшего на опытное титрование;
Т – поправка к титру 0,1 н. КМnO4;
1,7 – количество миллиграммов H2O2, соответствующее каждому миллилитру 0,1 н. КмnO4;
Н – навеска растительного материала.
Оцениваем влияние различных ионов на активность каталазы.
Делаем выводы.
Контрольные вопросы
1. К какому клаасу ферментов относится каталаза?
2. Напишите уравнение реакции расщепления пероксида водорода при участии каталазы.