Часть Вторая. Частная микробиология

Методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний

Лабораторная диагностика инфекционных заболеваний проводит­ся по следующим направлениям: 1)обнаружение возбудителя заболе­вания в патологическом материале; 2)обнаружение специфических антител в сыворотке крови больного (серологическая диагностика);

3)выявление у больного повышенной чувствительности к возбудителю с помощью аллергических проб.

Обнаружение и идентификацию возбудителя заболевания прово­дят, используя микроскопический, микробиологический и биологи­ческий методы.

Микроскопический метод используется для обнаружения возбу­дителя непосредственно в патологическом материале. Может приме­няться как самостоятельный метод в отношении некоторых микроор­ганизмов с характерной морфологией. С помощью микроскопического метода можно сделать заключение при обнаружении гонококков в гное, менингококков в спинномозговой жидкости, палочек туберку­леза, а также простейших: плазмодиев малярии, лейшманий, дизен­терийной амебы. Микроскопия применяется как обязательный этап исследования при микробиологическом методе.

Микробиологический метод применяется для выделения чистой культуры микробов и их идентификации по ряду признаков: морфоло­гии, способности окрашиваться красителями (тинкториальные свойс­тва), характеру роста на питательных средах (культуральные свойства), ферментации углеводов, белков и других веществ (био­химические свойства) и по антигенной структуре. Для эпидемиоло­гического анализа проводят внутривидовую идентификацию - опреде­ление серовара, фаговара, биовара. С целью назначения рациональ­ной антибиотикотерапии определяют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам.

Для экспресс-диагностики применяют РИФ со специфическими сыворотками. Метод позволяет выявить возбудителя в исследуемом материале в течение нескольких часов.

В последнее время для идентификации микробов применяют ме­тоды, основанные на исследовании состава ДНК. Для этого сущест­вует несколько методов.

1)Определение процентного соотношения гуанин + цитозин/

аденин + тимин (Г + Ц/А + Т) (см. главу 4).

2)Определение последовательности нуклеотидов в ДНК микроба. С этой целью путем нагревания вызывают разделение ДНК на две ни­ти, добавляют "ДНК-зонд" - участок известной ДНК, меченный ради­оактивной меткой, или ферментом, или биотином. ДНК-зонд присое­диняется к одной из нитей исследуемой ДНК, если он комплемента­рен, то есть соответствует ей. Присоединение обнаруживается по наличию метки.

3)Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет увеличить ко­личество исследуемой ДНК с помощью фермента полимеразы и таким образом обнаружить даже небольшие количества ДНК.

Биологический метод заключается в заражении животных иссле­дуемым материалом с последующим выделением чистой культуры или в обнаружении токсина и определения его вида и типа.

Серологические методы направлены на выявление специфических антител в сыворотке крови пациента. Для этого используют реакции иммунитета. С целью выявления динамики нарастания титра антител исследуют парные сыворотки, полученные от пациента в начале бо­лезни и через 1-3 недели.

Аллергический метод применяется для выявления повышенной чувствительности к возбудителю путем постановки внутрикожных проб с аллергеном.

Взятие материала на исследование и пересылка его в лабора­торию. Результат микробиологического исследования во многом за­висит от правильного взятия и пересылки материала в лабораторию. Выбор материала зависит от характера заболевания и локализации патологического процесса. Исследуют мокроту, гной, испражнения, мочу, кровь и др. Материал следует брать до лечения антибиотика­ми, в достаточном количестве, в стерильную посуду, с соблюдением приемов, обеспечивающих стерильность. Посуда и инструменты для взятия материала не должны содержать следов дезинфицирующих ве­ществ. Испражнения берут из прямой кишки ректальной трубкой или шпателем6 или же собирают в стерильные картонные тарелки; ис­пользуют также судна, обработанные дезинфицирующим раствором и тщательно промытые горячей водой. Мочу берут стерильным катете­ром. Рвотные массы собирают в стерильные банки, мокроту в сте­рильные банки с пробкой или в чашки Петри. Гнойное отделяемое ран берут стерильным ватным тампоном или исследуют тампоны, изв­леченные из ран при перевязках. Соскобы со слизистых оболочек

зева и носа - стерильным ватным тампоном на проволоке.

Специальные приемы используются при коклюше (метод кашлевых пластинок), при исследовании на менингококковое носительство (носоглоточный тампон).

Материал для исследования на неспорообразующие анаэробы при взятии и пересылке тщательно оберегают от соприкосновения с воз­духом.

Кровь для посева берут с соблюдением правил асептики, пред­варительно протерев кожу 70% спиртом, стерильным шприцем из лок­тевой вены в количестве 5-10 мл и сразу же засевают во флакон с жидкой питательной средой, количество которой должно быть в 10 раз больше количества взятой крови (для устранения бактерицидных свойств крови).

Исследуемый материал доставляется в лабораторию как можно скорее.

В направлении, прилагаемом к материалу, указывается: 1)фа­милия, имя, отчество больного; 2)характер материала; 3)день взя­тия; 4)предполагаемый диагноз; 5)цель исследования; 6)подпись врача.

Патогенные кокки

Среди кокков встречаются как сапрофиты, обитающие во внеш­ней среде и в организме человека, так и условно-патогенные и па­тогенные виды, вызывающие различные заболевания. Патогенные свойства были приобретены кокками в процессе эволюции, в ходе которой они приспособились к паразитическому существованию в ор­ганизме человека и животных, причем паразитизм у кокков выражен в различной степени.

К патогенным коккам относятся стафилококки, стрептококки, пневмококки, менингококки, гонококки. Все они могут вызвать гнойно-воспалительные процессы, поэтому их называют гноеродными кокками.

Строго шаровидную форму имеют стафилококки; стрептококки овально вытянуты; пневмококки сходны с ланцетом; менингококки и гонококки имеют вид кофейного зерна или бобовидную форму. Разме­ры клеток 0,5-1,5 мкм.

Стафилококки располагаются гроздьями, стрептококки - цепоч-

ками, пневмококки, менингококки и гонококки - попарно (диплокок­ки). Все патогенные кокки не имеют жгутиков и не образуют спор.

Стафилококки, стрептококки и пневмококки грамположительны, менингококки и гонококки грамотрицательны.

Менее всех требовательны к питательным средам стафилококки, которые растут на простых питательных средах; стрептококки и пневмококки культивируются на кровяных и сахарных средах, менин­гококки - на средах с добавлением сыворотки крови, для гонокок­ков питательная среда должна содержать нативный человеческий бе­лок. С увеличением паразитических свойств кокков снижается их устойчивость во внешней среде. Различаются они и по степени ор­ганотропности. Менее всего выражена органотропность у стафило­кокков, она возрастает у стрептококков и пневмококков и более всего выражена у менингококков и гонококков.