Серодиагностика и ретроспективная диагностика

Основывается на обнаружении ВНА и ПА в сыворотках крови больных и переболевших птиц. Выделение вируса из пораженных органов удается не всегда, поэтому лучшим мето­дом диагностики ИБ является серодиагностика. Кроме того исследование сывороток прово­дят при бессимптомном течении болезни. Используют парные сыворотки крови, получен­ные от одних и тех же птиц (или от одной и той же группы птиц). Важное значение в про­филактике ИБ имеет систематический контроль за иммунным состоянием стада. Такой кон­троль осуществляют посредством периодических исследований парных сывороток крови.

РН. В качестве АГ используют эталонный вирус ИБ. Исследуемые сыворотки и нор­мальную (контрольную) сыворотку перед постановкой реакции инактивируют при 58°С 30 мин. ВНА в сыворотке больных цыплят обнаруживаются, начиная с 13-го дня после заражения, их уровень зависит от возраста птицы, используемой для заражения. Так, у 4-нед цыплят уровень AT выше (ИН 3,5 lg), чем у 3-нед (1,5-2 lg). Способность вырабатывать AT после введения вируса у старших цыплят выражена сильнее, чем у молодых; AT сохраняют­ся в течение более 3 мес. ВНА обнаруживали через 3 дн в титре 1:8 у цыплят, зараженных вирусом. Титр AT достигал максимального значения (1:8000) через 7 дн.

РДП. ПА у птиц появлялись через 5 дн после экспериментального заражения и обнару­живались в течение 24 дн, по одним данным, и 70 дн, по другим, или всего периода яйце­кладки. Интенсивность РДП зависит от сроков исследования после заражения: реакция проявляется слабо до 10-го дня после заражения, становится заметной к 20-му дню и дер­жится более 20 нед. У цыплят, полученных от несушек, реагирующих интенсивно в РДП, ПА могут быть обнаружены до 5-6-дн возраста. Сыворотки с высокими титрами ВНА обыч­но бывают положительными и в РДП.

Установлена зависимость возраста птицы и титра AT; так, у 1-2-нед цыплят установле­ны титры AT 1:4 - 1:16, а у 3-нед - понижение до 1:2, у 4-6-нед - отсутствие AT, что соот­ветствовало морфологическим изменениям в исследуемых органах (фабрициева сумка, се­лезенка, зобная железа и миндалевидные железы слепой кишки). ПА у птиц образуются при естественном или искусственном заражении на 5-6-й день и сохраняются 2-3 мес, а ВНА чаще обнаруживают через 3 нед и сохраняются значительно дольше. Из этого следует, что отрицательный результат в РДП не говорит об отсутствии в сыворотке AT к вирусу ИБ. Раз­работан быстрый количественный метод РДП для оценки титра AT к вирусу ИБ с исполь­зованием 96-луночных панелей,а также метод обнаружения AT в РДП в течение 45 мин.

ELISA (ИФА). Для широкого серологического обследования применяют ИФА (ELI SA). Он позволяет раньше других тестов определять появление гуморальных AT. Предло­жен кинетический Kits-ELISA для определения уровня AT у птицы, иммунизированной про­тив ИБ. Kits-ELISA позволяет на микропланшетах одновременно анализировать 60 образ­цов. Блокирующий вариант ИФА обладает высокой чувствительностью и специфичностью и в 100 и более раз выше чувствительности РДП при выявле­нии AT к вирусу ИБ. При исследовании сыворотки крови кур на наличие AT в ИФА и РДП получены сопоставимые результаты, что позволяет рекомендовать ИФА для практического использования в диагностике ИБ. Детально отрабо­тана методика постановки непрямого варианта ИФА.