Работа №4 Определение содержания С-реактивного белка

Особенностью С-реактивного белка является свойство давать преципи­тат с С-полисахаридом пневмококка, что обусловлено его высоким сродст­вом к остаткам фосфорилированного холина в капсуле пневмококка.

Молекула СРБ состоит из 6 субъединиц с молекулярной массой 23 000 Д каж­дая, молекулярная масса всей частицы - 135 000—140 000 Д.

Концентрация СРБ в плазме крови человека очень низка, но при воспали­тельном и некробиотическом процессах может увеличиваться в 20—25 раз.

В большинстве лабораторий СРБ определяют как специфический белок - методом иммунотурбидиметрии («жидкостная» химия).

Принцип метода, реализуемого с применением данной технологии, бази­руется на способности СРБ образовывать иммунные комплексы с содержа­щимися в специфической сыворотке антителами к нему, что приводит к уве­личению абсорбции раствора, замеряемой при 340 нм. Для количественного определения СРБ строится калибровочная (градуировочная) кривая. Реакция осуществляется при комнатной температуре. Время определения - ме­нее 30 мин.

Эта методология и технология исследования предлагается и фирмами «Ла-хема», «Хуман» «Кормэй» и многие другие. Поставляемые ими наборы реаген­тов включают в себя антисыворотку, преципитационный буфер. Для оценки результатов используется стандарт.

Не требуют применения измерительной фотометрической аппаратуры ис­следования С-реактивного белка, проводимые с использованием тест-систем. В состав набора кроме реагента, содержа­щего антитела к СРБ, входят позитивные (положительные) и негативные (от­рицательные, не содержащие анализируемого белка) контрольные сыворотки (человека). Для количественного определения СРБ на изготовленную из пла­стика тест-полоску наносят: 1 каплю положительной, 1 каплю отрицательной и 1 каплю исследуемой сыворотки крови. По характеру контролируемой в те­чение определенного времени реакции судят о содержании СРБ. Возможно и полуколичественное исследование, отличающееся от предыдущего нанесени­ем на поля (зоны) полоски разного количества проб (0,01 и 0,05 мл) анализи­руемой сыворотки крови.

Латексовые и другие быстрые в исполнении тесты определения С-реактив­ного белка могут быть выполнены с применением наборов реактивов.