2015-04-17
904
Задание: определить бактериальную обсеменённость молока.
Приборы и реактивы: стерильные пробирки, пробы молока, редуктазник, рабочий раствор метиленовой сини, 0,005% раствор резазурина, резиновые пробки.
1. Проба на редуктазу с метиленовой синью. ГОСТ 9225-84
Сущность метода основана на определении биохимической активности микробов, продуцирующих фермент редуктазу. Редуктаза обладает способностью обесцвечивать некоторые краски, в частности метиленовую синь. Однако не все микроорганизмы обладают восстановительной активностью. В большей степени этим свойством обладают молочнокислые стрептококки, кишечная палочка, масляно-кислые и гнилостные бактерии. Несколько меньше – сальмонеллы и стафилококки, а патогенные стрептококки лишены этой способности.
Приготовление основного спиртового раствора метиленовой сини.
10 г метиленовой сини залить 100 cм3 спирта и оставить в термостате на сутки при 37°С. Профильтровать. Стандартный рабочий раствор готовят из основного: к 5 cм3 этого раствора прибавить 195 cм3 дистиллированной воды.
|
|
|
Техника определения:
1. В чистую пробирку налить 1 cм3 рабочего раствора метиленовой сини и 20 cм3 исследуемого молока, закрыть пробкой и хорошо перемешать.
2. Пробирку с молоком поместить в редуктазник с температурой воды 38-40°С уровень воды в редуктазнике должен быть выше уровня молока в пробирке, необходимо постоянно поддерживать температуру воды
3. Проверять время обесцвечивания проб через 40 минут, 2,5 часа и через 3,5 часа. Окончанием испытания на редуктазу считать момент, когда молоко в пробирках обесцветиться. Наличие небольшого окрашенного кольцеобразного слоя наверху или окраска небольшой части внизу в расчёт не принимаются.
Молоко по количеству микрофлоры делят на 4 класса.
Таблица 10.
Определение класса бактериальной загрязнённости молока
(с метиленовой синью)
| Скорость обесцвечивания | Количество бактерий в 1 мл молока, КОЕ | Класс молока |
| 40 минут 2,5 часа до 3,5 часов более 3,5 часов | 4 млн. до 20 млн. 500 тыс-4 млн. от 300 до 500 тыс. До 300 тыс. | высший |
2. Проба на редуктазу с резазурином.
Готовят основной раствор резазурина: 10 мг резазурина растворяют в 200 cм3 дистиллированной воды и хранят в холодильнике до 30 суток при температуре 3-50С. Рабочий раствор готовят, разбавляя основной раствор дистиллированной водой в соотношении 1:10, он содержит 0,005% резазурина.
Техника определения: В чистую пробирку отмеривают 10 cм3 молока, добавляют 1 cм3 0,005%-ного рабочего раствора резазурина. Пробирку закрывают пробкой, осторожно перемешивают содержимое, ставят на водяную баню при температуре 37°С±1°С и в течение 1 и 1,5 часа наблюдают за изменением окраски. Интенсивность окраски содержимого пробирки определяют путём сравнения с данными таблицы №11.
|
|
|
Таблица 11.
Количество бактерий в молоке и его класс по редуктазной пробе с
резазурином
| Класс молока | Скорость обесцвечивания, Час. | Цвет молока | Количество бактерий в 1 cм3 молока. |
| Высший | 1,5 | Серо-сиреневый до сиреневого со слабым сероватым оттенком. Серо-сиреневый до сиреневого со слабым сероватым оттенком. Сиреневый с розовым оттенком или ярко розовый. Бледно-розовый или белый. | До 300 тыс. От 300 тыс. до 500тыс. От 500 тыс. до 4 млн. от 4 млн. до 20 млн. |
Факторы, влияющие на точность определения:
1. Неправильно приготовленный раствор метиленовой сини или резазурина
2. Низкая температура в водяной бане
3. Грязные пробирки
4. Неплотно закрытые пробирки
Выполнить самостоятельно:
1. Определить бактериальную обсеменённость молока с метиленовой синью и резазурином
| Пробы | Время обесцвечивания | Количество микрофлоры | Санитарная оценка молока |
| 1. 2. |
