Опыт 5. Количественное определение общего холестерина в сыворотке крови прямым методом по реакции Златкис – Зака

Метод основан на реакции холестерина с уксусной и серной кислотами в присутствии хлорида железа.

К 0,1 мл сыворотки крови прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа, перемешивают. Готовят контроль: к 0,1 мл дистиллированной воды прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа. Оставляют на 15 минут.

Колориметрируют против контроля на фотоэлектроколориметре при длине волны 510-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см.

Из стандартного раствора холестерина готовят разведения, как указано в таблице 4.

Таблица 4. Приготовление растворов холестерина для построения калибровочного графика.

№ пробирок	Стандартный раствор холестерина, мл	Ледяная уксусная кислота, мл	Рабочий раствор хлорида железа, мл	Содержание холестерина в пробе, мг%
	0,1	3,0	2,0
	0,2	3,0	2,0
	0,3	3,0	2,0
	0,4	3,0	2,0
	0,5	3,0	2,0

Через 20 минут пробы фотометрируют против контроля. По результатам строят калибровочный график.

По калибровочному графику определяют содержание холестерина в сыворотке крови. Норма содержания холестерина в сыворотке крови – 120-250 мг% (3,12-6,50 ммоль/л).

Контрольные вопросы

1. Почему чаще встречается гиперхолестеролемия, а не гипохолестеролемия?

2. Как изменится синтез холестерина при питании только растительной пищей? Почему?

3. Укажите, в каких органах происходит синтез холестерина «на экспорт».

4. Каким образом большая часть холестерина выводится из организма?

5. В чем различие функций фосфолипидов и триацилглицеролов?

Работа 3. Переваривание белков. Определение кислот

Желудочного содержимого

Опыт 1. Переваривание белков пепсином.

Переваривание белков начинается в желудке под влиянием желудочного сока. Пепсин является эндопептидазой. В результате гидролиза белков пепсином образуются пептоны - смесь более или менее сложных полипептидов, а также в небольшом количестве свободные аминокислоты.

В 4 пробирки наливают по 2 мл молочноацетатной смеси. пробирку 1 помещают в кипящую водяную баню, 2 – в водяную баню при 40⁰С, 3 – оставляют при комнатной температуре, 4 пробирку помещают в лед. Через 10 минут во все пробирки добавляют по 0,1 мл желудочного сока, перемешивают. Под действием протеолитического фермента пепсина растворимый казиноген молока переходит в нерастворимый пепсин. Наблюдают за временем появления первых сгустков казеина на стенках пробирок. Делают вывод об оптимальной температуре действия фермента.