Работа 2. Фосфолипиды. Холестерин

Опыт 1. Выделение фосфатидов из тканей головного мозга.

Высушенный с гипсом мозг (5 г) переносят в колбу и заливают 10 мл спирта. Присоединяют обратный холодильник и помещают на 15-20 минут в нагретую до 70⁰С водяную баню, периодически встряхивая. Если значительная часть спирта испаряется, его доливают. По окончании экстракции колбу охлаждают, вытяжку отфильтровывают.

Опыт 2. Качественная реакция на лецитин с хлоридом кадмия.

К 2 мл спиртового раствора лецитина (опыт 1) добавляют 1 мл насыщенного спиртового раствора хлорида кадмия. Выпадает белый хлопьевидный осадок комплексного соединения лецитина с хлоридом кадмия. Эту реакцию не дают растворы холестерина и растительных масел.

Опыт 3. Выделение холестерина из тканей головного мозга.

Высушенный с гипсом мозг (3 г) насыпают в сухую пробирку, приливают 6 мл хлороформа, взбалтывают 10 минут. Экстракт отфильтровывают в сухую пробирку.

Опыт 4. Качественные реакции на холестерин.

Реакция Шиффа.

В пробирку наливают 1 мл хлороформного раствора холестерина и осторожно по стенке подслаивают 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе раздела жидкостей появляется кольцо красного цвета.

Реакция Сальковского.

Жидкость после проведения пробы Шиффа встряхивают. После расслаивания верхний слой окрашивается в красный цвет, нижний имеет желто-оранжевую окраску с зеленой флуоресценцией.

Реакция Либермана – Бурхарда.

В пробирку наливают 1 мл хлороформного раствора холестерина, добавляют 0,5 мл уксусного ангидрида и 2 капли концентрированной серной кислоты. Хорошо перемешивают. Образуется красная окраска, переходящая в фиолетовую, затем синюю и зеленую. При незначительном содержании холестерина может сразу появиться зеленая окраска.

Цветные реакции на холестерин определяются дегидратацией и окислением холестерина под действием концентрированной серной кислоты и последующей конденсацией продуктов с образованием соединений с сопряженными двойными связями, дающими с серной кислотой различные окрашенные производные.