Микроинъекция ДНК

Метод введения ДНК с помощью микроинъекций был разработан в начале 70-х годов Андерсоном и Диакумакосом.

Степень интеграции – отношение числа трансгенных особей к общему числу родившихся особей. Незначительно варьирует в зависимости от вида животных и у мышей составляет не более 15%.

Общая эффективность трансгенеза – отношение числа полученных трансгенных особей к общему числу пересаженных эмбрионов. Варьирует в незначительной степени и у мышей составляет около 2%.

Возникновение этого метода стало возможно с появлением прибора для изготовления микропипеток диаметром 0.1-0.5 микрона и микроманипулятора. Так, плазмиды, содержащие фрагмент вируса герпеса с геном тимидинкиназы (ТК) и плазмиду рВR322, были инъецированы в клетки и было показано, что ТК^-ген проник в ядра и нормально в них реплицировался.

Успех трансгенеза зависит от того, насколько приближены условия извлечения эмбрионов, условия проведения микроинъекции и культивирования эмбрионов к физиологически нормальным. Выход трансгенеза зависит также и от эффектов генетического фона, то есть большое значение имеет выбор линий животных.

Показано, что частота интеграции экзогенной ДНК при инъекции в цитоплазму зигот, несмотря на меньшую травматичность метода, значительно ниже, чем при инъекции в пронуклеус.

Оптимальный размер переносимой ДНК: около 10³ пар нуклеотидов

Применение: получение трансгенных животных

Преимущество: 1) За 1 час можно инъецировать 500-1000 клеток, причем в лучших экспериментах в 50% клеток наблюдается стабильная интеграция и экспрессия инъецированных генов.

2) позволяет вводить любую ДНК в любые клетки, и для сохранения в клетках введенного гена не требуется никакого селективного давления.