Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Метод ПЦР (метод полимеразной цепной реакции, PCR, polymerase chain reaction) представляет собой многократное увеличение числа копий специфического участка ДНК, катализируемое ферментом ДНК-полимеразой. Метод разработан в 1985 году К. Мюллисом с сотрудниками.

ПЦР широко используется как для научных исследований, так и для диагностики в медицине, криминалистике и др. областях. ПЦР является прямым и самым современным методом анализа ДНК

Необходимые компоненты для проведения ПЦР:

ДНК-матрица (ДНК или ее часть, содержащую искомый специфический фрагмент). Образец ДНК должен содержать по меньшей мере одну полноразмерную интактную копию исследуемой нуклеотидной последовательности. Большее число целевых копий повышает вероятность успешной амплификации. Наличие однонитевых разрывов в целевой ДНК блокирует амплификацию.

Используют 0,1-1 мкг геномной ДНК млекопитающих

10-100 нг дрожжевой ДНК

1-10 нг бактериальной ДНК

0,1-1 нг плазмидной ДНК

ДНК-матрица может вноситься в ПЦР как в денатурированном, так и в нативном состоянии. Эффективность ПЦР выше при использовании линейных молекул ДНК, т.е. плазмидная матрица может быть обработана теми рестриктазами, которые заведомо негидролизуют структуру целевой последовательности.

Раствор с ДНК-матрицей не должен содержать примесей ЭДТА в концентрации более 1мМ, а также отрицательно заряженных ионов.