Микробиологическое исследование мокроты

Микробиологическое исследование является важнейшим звеном диагностическою поиска и верификации возбудителя пневмонии. Оно предполагает не только выделение возбудителя, но и изучение его свойств, в том числе чувствительность к различным медикаментозным препаратам, обладающим бактерицидным и бактериостатическим действием.

С этой целью используют метод посева мокроты на различные питательные среды. В образце мокроты, доставленной в лабораторию, отбирают гнойные комочки и тща­тельно промывают их в чашке Петри с изотопическим раствором натрия хлорида, что в известной степени позволяет освободить их от микрофлоры верхних дыхательных путей. Посев гнойных комочков мокроты производят па различные питательные среды, состав которых описывается в специальных руководствах по микробиологии. Среды с посевами инкубируют при 37,5°С в течение 24 ч. Из выросших колоний выделяют чистые культуры, идентифицируют их известными микробиологическими методами и опреде ляют чувствительность к антибиотикам.

Для количественного определения содержания микроорганизмов мокроту гомогепп зируют, смешивают с питательным бульоном и из смеси готовят последовательные де< Я тпкратные разведения, которые засевают на чашки Петри с кровяным агаром. Через 24 Ч инкубации при 37,5°С учитывают результаты, подсчитывая однотипные по внешнему виду колонии и учитывая степень разведения материала. Из колоний готовят мл.пси и микроскопируют их.

Интерпретация результатов

Трактовка результатов микробиологического исследования мокроты достаточно СДО I на, что объясняется рядом факторов. Выше уже упоминалось о постоянном обсеменении бронхиального содержимого микрофлорой верхних дыхательных путей и ротовой no КХ ти и частом присутствии в нормальном трахеобропхиалыюм содержимом здоровых ШВ дей большинства наиболее типичных возбудителей респираторных заболеваний (гшевМО кокков, стрептококков, стафилококков и др.). В связи с этим выделение в мокроте п КОЛ микробиологических исследований ассоциации различных микроорганизмов, большая

часть иа которых в данном конкретном случае являются услонпо-патогсппыми, чрезвы­чайно затрудняет' установление возбудителя заболевания. Поэтому для интерпретации результатов микробиологического исследования мокроты следует _учитывать количест­венное преобладание того или иного вида бактерий (больше 10⁶— 10' м.к./мл), появление определенных микроорганизмов в фазе обострения и исчезновение их в период ремиссии При этом очень важно учитывать клиническую картину заболевания (см. табл. 3.13).

Оценивая количественно результаты исследования микробной обсемеиеиности у больных пневмонией, следует помнить о чрезвычайно высокой чувствительности это­го показателя к назначению антибиотиков. Даже кратковременное лечение антибактери­альными препаратами может приводить к резкому снижению микробной обсемеиеино­сти, что не позволяет адекватно оцепить результаты исследования мокроты. Поэтому целесообразно осуществлять забор мокроты до назначения лечения антибиотиками.

Следует также отметить, что для культивирования внутриклеточных возбудителей пневмоний (микоплазмы, легионеллы, хламидии, риккетсии) используют специальные селективные питательные среды. Рутинное микробиологическое исследование с исполь­зованием обычных питательных сред (агар-агар) никогда не дает положительных ре­зультатов. Поэтому выбор конкретных методов микробиологического исследования должен проходить с участием лечащего врача, который обязан информировать врача-ла­боранта об имеющихся у него подозрениях относительно возможной роли вггутрикле-точпых возбудителей в возникновении пневмонии у данного пациента.

Следует добавить, что в реальной клинической практике даже технически СОВвр шепиое микробиологическое исследование мок/юты позволяет ВЫЯВИТЬ возбуди геля заболевания не чаще, чем в 40-60% случаев заболевания. Поэтому для верификации возбудителя могут быть использованы другие современные методы исследования. Информативность бактериологического исследования может быть существенно новы |вепа при использовании в качестве исследуемого биологического материала не мокро тм| а трахеоброихиалыюго аспирата, жидкости, полученной при броихоадьнсолярпом лаваже (ЖБАЛ), бронхоскопии и т.п. Методы получения бропхоадьвеолярпого содер жимого и техника бронхоскопии подробно описаны в главе 4.

Кроме того, для выявления возбудителей пневмонии может быть использован метол иммуиофлюоресценции различных биологических материалов (материал броИХОСКО пии, кровь, плевральное содержимое и.т.п.), методы ПЦР-диагиостики, исследование уровня специфических антител в сыворотке крови. К сожалению, до сих пор эти спосо бы диагностики не нашли широкого клинического применения и пока используются лишь в крупных специализированных центрах и лабораториях.

Определение чувствительности к антибиотикам

Определение чувствительности к антибиотикам основано на оценке роста микроор ганизмов, культивируемых на плотных или жидких питательных средах в присутствий антибиотиков. Наиболее простым способом является посев взвеси микроорганизмов вы деленной культуры на поверхность плотной питательной среды (агара) в чашках Петри На поверхность чашек помещают диски с антибиотиками в стандартных концентрациях и инкубируют при 37,5°С в течение 18 ч. Результаты оценивают, измеряя с помощью щ пейки диаметр зоны задержки роста микробов.

Более точные данные могут быть получены при применении количественных мсти Зов с определением минимальной подавляющей концентрации (МПК) антибиотиков. С этой целью готовят серию двукратных разведений антибиотиков в жидкой питатель­ной среде (бульон) и добавляют 0,2 мл взвеси культуры исследуемых микроорганизмов в концентрации 10⁵— 10⁶ м.т./мл. Все образцы, включая контрольный, не содержащий антибиотиков, инкубируют при 37,5°С в течение 24 ч. Минимальная концентрация ап тибиотика в последней пробирке, в которой наблюдалась полная задержка роста культу­ры, соответствует МПК препарата и отражает степень чувствительности микроорганиз­мов к антибиотику.

По степени чувствительности к антибиотикам микроорганизмы делят натри группы:

1. Чувствительные — микроорганизмы, рост которых подавляется при МПК, coothci ствующей концентрации препарата в сыворотке крови при применении обычных те­рапевтических доз препарата.

2. Умеренно устойчивые — такие штаммы микроорганизмов, МПК которых достиг'84 гТСЯ при назначении максимальных терапевтических доз антибиотика.

3. Устойчивые микроорганизмы, рост которых не подавляется максимально допусти­мыми дозами лекарственных препаратов.

Такое определение степени чувствительности к антибиотикам возможно при приме нении количественных методов разведения в жидких питательных средах. Тем не менее существует определенная корреляция между значениями МПК и размером зон задеря ки роста микробов при применении бумажных дисков с антибиотиками, что дает опт вапие использовать этот простой и удобный способ для ориентировочного количествен ггого описания степени чувствительности.

Следует все же помнить, что результаты определения чувствительности к апгибпо тикам in vitro не всегда соответствуют реальной клинической ситуации, особенно при смешанной инфекции, снижении иммунологической реактивности организма, затрудие-ииях, возникающих при попытке выделить культуру основного возбудителя и