Форменных элементов крови

Оборудование. Аппарат Laborscale, автоматические дозаторы.

Реактивы. Разводящий раствор – изотонический раствор натрия хлорида, специально очищенный; 2 % раствор сапонина.

Материал. Кровь с антикоагулянтом (Трилон Б).

Принцип работы аппарата Laboscale основан на кондуктометрическом методе. Суспензию форменных элементов, полученную при соответствующем разведении определенного количества крови изотоническим раствором натрия хлорида, пропускают через микроотверстие (апертуру). По обе стороны от апертуры находятся электроды. На них подается постоянный электрический ток и создается постоянное электрическое поле. Так как электрическое сопротивление клеток значительно выше по сравнению с электролитом, то каждая клетка, проходя через микроотверстие, увеличивает сопротивление между электродами. Возникающий при этом электрический импульс передается на счетное устройство с цифровой индикацией. Пропуская через апертуру строго определенное количество суспензии и регистрируя число импульсов, можно осуществлять подсчет клеток, а анализ амплитуды импульсов позволяет оценить их размеры.

1. Последовательность работы на аппарате Laboscale

при подсчете эритроцитов и лейкоцитов

1.1. Установка параметров для подсчета эритроцитов и лейкоцитов.

Диаметр измерительного капилляра – 100 мкм

Измерительный ток – 200 мкА (кнопка I₃)

Дифференциальный дискриминатор

Нижний порог – 0,5-1,5 в

Верхний порог – 10 в

1.2. Определение чистоты (т.е. величины фона) разводящего раствора. Для этого в измерительный бюкс наливают 5 мл разводящего раствора. Бюкс устанавливают на магнитную подставку и медленно поднимают так, чтобы измерительная трубка и электрод были полностью погружены в раствор. Нажатием кнопки 7 (START) запускают измерение. На основе среднего арифметического, полученного в результате нескольких измерений, получают величину фона разводящего раствора.

1.3. Приготовление разведений крови для подсчета эритроцитов и лейкоцитов. В 2 пробирки наливают по 5 мл разводящего раствора. В пробирку № 1 автоматическим дозатором вносят 8 мкл крови, перемешивают и используют для подсчета лейкоцитов (разведение крови 1:630).

В пробирку № 2 вносят 50 мкл полученного разведения, перемешивают и используют для подсчета эритроцитов (разведение крови 1:6300).

1.4. Подсчет лейкоцитов. Для подсчета лейкоцитов необходимо лизировать эритроциты. В пробирку № 1 (разведение крови 1:630) добавляют 2 капли 2 % раствора сапонина и по истечении 3 мин полученный гемолизат переливают в измерительный бюкс. Проводят подсчет по методике, описанной в пункте 1.2. Из полученного результата вычитают величину фона разводящего раствора и умножают на 100 (получают число лейкоцитов в 1 мкл крови).

Пример: величина фона – 2, на цифровом индикаторе – 62.

Число лейкоцитов = (62-2) · 100 = 6000 / 1 мкл,

или 6,0 · 10⁹ /л.

После подсчета лейкоцитов измерительную трубку необходимо промыть от остатков сапонина, что достигается многократным пропусканием разводящего раствора.

1.5. Подсчет эритроцитов. Для подсчета эритроцитов используют разведение крови 1:6300 (пробирка № 2). Содержимое пробирки переливают в измерительный бюкс и проводят измерение аналогично методике, изложенной в пункте 1.2. Из полученного результата вычитают величину фона разводящего раствора и умножают на 10000 (получают число эритроцитов в 1 мкл крови).

Пример: величина фона – 2, на цифровом индикаторе – 445

Число эритроцитов = (445-2) · 10000 = 4430000 / 1 мкл,

или 4,43 · 10¹² /л.

По окончании измерений промывают измерительную трубку разводящим раствором.

2. Последовательность работы на аппарате Laboscale

при подсчете тромбоцитов

2.1. Установка параметров для подсчета тромбоцитов.

Диаметр измерительного капилляра – 70 мкм

Измерительный ток – 400 мкА (кнопка I₄)

Дифференциальный дискриминатор

Нижний порог – 0,4-0,8 в

Верхний порог – 8-10 в

2.2. Определение величины фона разводящего раствора – аналогично пункту 1.2.

2.3. Приготовление разведения крови для подсчета тромбоцитов. Для предупреждения агрегации тромбоцитов используется полиэтиленовая посуда. В пробирку с 0,9 мл разводящего раствора автоматическим дозатором вносят 100 мкл крови, перемешивают и подвергают центрифугированию при 1000 об/мин в течение 3-5 минут. Из средней части супернатанта отбирают 8 мкл полученной тромбоцитарной взвеси и вносят в пробирку с 5 мл разводящего раствора. Перемешивают и проводят измерение в соответствии с вышеизложенной методикой (пункт 1.2.). Из полученного на цифровом индикаторе значения необходимо вычесть величину фона и умножить на 1000 (получают число тромбоцитов в 1 мкл крови).

Пример: величина фона – 3, на цифровом индикаторе – 325.

Число тромбоцитов (325-3) · 1000 = 322000 / 1 мкл,

или 322 · 10⁹ /л.