Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови (по Райтману, Френкелю)

Принцип метода. При участии аминотрансфераз в организме человека осуществляются процессы межмолекулярного переноса аминогрупп с донорской α-аминокислоты на акцептор – α-кетокислоту без промежуточного образования аммиака. Этот процесс был открыт российскими учеными Браунштейном и Крицман и назван переаминированием (трансаминирова - нием). В результате него при участии аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) образуются щавелевоуксусная и пировиноградная кислоты.

При добавлении раствора 2,4-динитрофенилгидразина ферментативный процесс останавливается и возникают??? гидразоны пировиноградной и отчасти щавелевоуксусной кислот. В щелочной среде они дают окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству образовавшейся ПВК.???

взвешенного кристаллического пирувата натрия растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, переносят в мерную колбу ёмкостью 100 мл и доводят объём дистиллированной водой до метки; 1,0 мл раствора содержит 110 мкг пирувата натрия, что соответствует 88 мкг пировиноградной кислоты.

Ход определения активности аланинаминотрансферазы:

В пробирку вносят 0,5 мл субстратного раствора, предварительно прогрев до 37˚С в течение 5 мин, для исследования активности АлАТ, затем добавляют 0,1 мл испытуемой сыворотки и помещают смесь на 1 ч в термостат для инкубации при 37˚С. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении активности АсАТ.

В сыворотке крови практически здоровых взрослых людей активность АсАТ составляет 0,10-0,45 ммоль/ ч·л; активность АлАТ – 0,10-0,68 ммоль/ ч·л.