2015-04-30
820
Определение уровня общих липидов в сыворотке крови по цветной реакции с сульфованилиновым реактивом
Принцип метода. Продукты распада липидов образуют с реактивом (состоящим из серной, ортофосфорной кислот и ванилина) соединение, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию общих липидов в сыворотке крови.
Реактивы
1. Серная кислота, концентрированная.
2. Ортофосфорная кислота, концентрированная.
3. Водный раствор ванилина, 6 г/л.
4. Фосфорнованилиновая смесь. (4 объёма концентрированной ортофосфорной кислоты смешивают с одним объёмом водного раствора ванилина).
5. Хлороформ, «хч» или «для наркоза».
6. Основной (12 г/л) стандартный раствор триолеина.
Ход определения. К 0,05 мл сыворотки прибавляют 2,5 мл концентрированной серной кислоты. Содержимое пробирки тщательно перемешивают и помещают на 10 мин в кипящую водяную баню. Пробирку вынимают и сразу же охлаждают водопроводной водой до комнатной температуры. Из нее отбирают 0,2 мл смеси, которую переносят в другую пробирку, содержащую 3 мл фосфорнованилиновой смеси. После тщательного перемешивания пробу оставляют на 45 мин в темноте при комнатной температуре. Абсорбцию измеряют при длине волны 525 нм (500-560), используя зелёный светофильтр и толщину слоя кюветы 5 мм. Результаты сравнивают с контрольной пробой.
|
|
|
Контрольную пробу ставят так же, как и опытную, но вместо сыворотки берут 0,05 мл воды.
При оценке результатов по параллельно обрабатываемой стандартной пробе расчет производят по формуле:
Соп (г/л) = Аоп: Аст · Сст, где
А – абсорбция опытных и стандартных проб,
Сст – концентрация основного стандартного раствора (12 г/л).
В сыворотке крови здоровых людей содержание общих липидов составляет 4-8 г/л.
